【摘 要】
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目的 实现Geobacillus thermoglucosidasius来源的淀粉分支酶在大肠杆菌中的胞内表达,并研究其理化性质. 方法 本研究首先将来源于G thermoglucosidasius STB02的淀粉分支酶基因插入质粒pET-20b(+)的T7启动子序列下游,构建了表达载体pET-20b(+)/sbe,并将其转化宿主大肠杆菌BL21(DE3)；通过发酵条件优化,实现了淀粉分支酶在E
【机 构】
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江南大学食品学院,江苏 无锡 214122 江南大学食品学院,江苏 无锡 214122;江南大学食
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛
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目的 实现Geobacillus thermoglucosidasius来源的淀粉分支酶在大肠杆菌中的胞内表达,并研究其理化性质. 方法 本研究首先将来源于G thermoglucosidasius STB02的淀粉分支酶基因插入质粒pET-20b(+)的T7启动子序列下游,构建了表达载体pET-20b(+)/sbe,并将其转化宿主大肠杆菌BL21(DE3)；通过发酵条件优化,实现了淀粉分支酶在E.coli中的胞内过量表达.其次,将带有组氨酸标签的重组分支酶通过镍柱亲和层析一步纯化,得到了电泳纯酶蛋白. 结果 通过对重组淀粉分支酶进行理化性质分析后发现,淀粉分支酶最适反应温度为50℃；在45℃、50℃下保温2h,其酶活基本不变,55℃、60℃下保温2h,其酶活分别降低为初始的90％、60％,在65℃、70℃下的半衰期分别为0.35 h、1.10h；其最适pH为7.5,在pH 5.5-9.0范围内具有较高的稳定性；Mg2+、Ba2+、K+和Na+在较低浓度下对重组酶具有一定的激活作用,而Ni2+、C02+则显著的抑制其活力；其动力学性质可以用米氏方程进行描述,以支链淀粉标准品为底物时的Km值为1.14μg/mL. 讨论 本重组分支酶能在大肠杆菌中胞内过量表达,属于耐热酶,稳定性较好.
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本实验旨在通过对一株高粱红曲霉菌株L(M.kaoliang)进行液态发酵培养基的优化,确定纯种液态发酵曲最佳发酵培养基成分,以期应用于红曲黄酒的酿造体系.实验以产糖化酶、红曲色素以及桔霉素能力为优化指标,采用Plackett-Burman(PBD)设计,从7个因素中筛选显著的影响因素,然后运用中心组合设计(CCD)结合满意度函数法(FD)进行多重响应的分析,结果显示最佳发酵培养基配方：米粉3％,葡
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目的：未经重组的纯芽孢可以作为新兴的固定化载体用于吸附蛋白.本研究中,枯草芽孢杆菌的芽孢通过吸附固定来源于C.saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶,从而提高酶的稳定性和重复使用率.方法：对芽孢吸附的条件,即酶蛋白所处介质的pH值、吸附温度和时间已经初始酶的添加量三个方面进行优化,并初步研究了固定化酶的性质及在乳果糖制备中的应用.结果与讨论：在最优的吸附条件下,即介质pH值为4.5,吸
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