西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

来源 :第十一届微生物教学和科研及成果产业化研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:biiq123
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利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经Sall单酶切后电转化Pichiapastoris GS115菌株,经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut+/His+表型高拷贝转化子,经1%甲醇诱导5d后,SDS-PAGE检测发酵液上清,在66KD处有一特异蛋白条带表达。Western blot鉴定表明.表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-western blot证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合,支持了HC-Pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。
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