论文部分内容阅读
目的 人胰岛素受体基因(HIRWT)突变是导致A型胰岛素抵抗的遗传基础之一,我们先前的研究提示该基因突变所致严重胰岛素抵抗可能与肌肉糖原合成障碍有关。本研究采用体外细胞实验,探讨人胰岛素受体基因R1174W错义突变对胰岛素受体后信号转导通路分子功能的影响。方法 采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得包含R1174W突变的人胰岛素受体cDNA片段,通过GATEWAY技术分别构建携带野生型(HIRWT)、突变型(R1174W)人胰岛素受体基因及空质粒(GFP)的表达克隆。采集6例胃肠手术患者腹直肌样本进行原代细胞培养,通过慢病毒包装用携带目的片段的质粒转染293ft细胞,再随机整合转导入人骨骼肌细胞基因组中。