【摘 要】
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背景与目的:肺癌和其他肿瘤一样被认为是干细胞疾病,肺癌干细胞研究的焦点为肺癌干细胞的分离、纯化和鉴定,但肺癌干细胞表面标记物还不明确,因此阻碍了肺癌干细胞的研究.目前国内外还没有确切的、得到公认的肺癌干细胞的筛选标记分子、指标和方法.本研究采用流式细胞术检测CD133, CD24, CD44和CD221在不同类型人肺癌细胞株中的表达，筛选可能的肺癌干细胞表面标志分子，采用无血清悬浮培养成球并顺铂诱
【机 构】
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天津市肺癌研究所 天津医科大学总医院
【出 处】
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中国抗癌学会肺癌专业委员会第十二届全国肺癌学术大会
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背景与目的:肺癌和其他肿瘤一样被认为是干细胞疾病,肺癌干细胞研究的焦点为肺癌干细胞的分离、纯化和鉴定,但肺癌干细胞表面标记物还不明确,因此阻碍了肺癌干细胞的研究.目前国内外还没有确切的、得到公认的肺癌干细胞的筛选标记分子、指标和方法.本研究采用流式细胞术检测CD133, CD24, CD44和CD221在不同类型人肺癌细胞株中的表达，筛选可能的肺癌干细胞表面标志分子，采用无血清悬浮培养成球并顺铂诱导的方法富集肺癌细胞株中的肺癌干细胞，并检测筛选到的表面标志分子在其中的表达，以期获得能够有效分离肺癌干细胞的表面标志分子，为后续人肺癌肿瘤干细胞的筛选和功能研究奠定实验基础。
方法:流式细胞术检测CD133, CD24. CD44和CD221在人肺腺癌细胞株A549、鳞癌细胞株YTMLC-9、具有相同遗传背景的人肺大细胞肺癌高转移潜能细胞株L9981和低转移潜能细胞株NL9980中的表达，筛选可能的肺癌干细胞标记分子;以L9981和A549为研究对象，经无血清悬浮培养并顺铂诱导L9981后，获得肺癌细胞球体。对含血清培养贴壁L9981细胞和无血清培养成球后的L9981细胞，通过显微镜下观察比较二者的生物学形态，应用Vi-cell细胞活力分析仪计数细胞并绘制生长曲线比较二者的增殖能力，通过Transwell实验研究它们的侵袭能力差异，并通过接种裸鼠观察二者在体内的成瘤性来研究肺癌细胞球体的生物学功能，验证其干性。同样方法鉴定A549的生物学功能。并进一步检测CD133和CD24在此肺癌干细胞样细胞亚群中的表达水平，以验证CD133和CD24作为可能的肺癌干细胞分选标记物的可行性。
结果:(1)流式细胞仪单参数检测结果显示，CD221和CD44在A549 ,YTMLC-9,L9981和NL9980肺癌细胞株中表达水平较高，CD133和CD24在各肺癌细胞株中表达水平较低。流式双参数检测CD133(+的与CD24(+/-), CD22i(+日与CD24(+/-)组合表达情况。结果显示，CD133-CD24-,CDi33-CD24+,CD221-CD24-、CD221+CD24-在各细胞株中表达水平较高，CD133+CD24-、CD133+CD44+,CD221-CD24+,CD221+CD24+表达水平较低。CD221在A549和YTMLC-9细胞中表达水平无显著差异，而在具有不同转移潜能的大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980中，在两者中的表达具有显著性差异(P<0.01)。
结论:(1)初步研究结果显示CD133+CD24-、CD133-CD24+可能是非小细胞肺癌干细胞的表面免疫分子标记:(2)CD221在L9981和NL9980中表达水平具有显著差异(p<0.01)，两者具有相同遗传背景，但转移性潜能高低不同，推测CD221表达差异与此有关。
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