【摘 要】
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目的 构建真核表达载体pcDNA3.1/β-catenin,转染鼻咽癌CNE-2细胞并观察 β-catenin的表达.Wnt信号传导途径不恰当的激活参与多种人类癌症的发病,研究表明β-catenin是Wn
【出 处】
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第九届泛珠江区域放射肿瘤学学术大会暨肿瘤放射治疗多中心协作研讨会、重庆市医学会放射肿瘤治疗学专业委员会2014年会
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目的 构建真核表达载体pcDNA3.1/β-catenin,转染鼻咽癌CNE-2细胞并观察 β-catenin的表达.Wnt信号传导途径不恰当的激活参与多种人类癌症的发病,研究表明β-catenin是Wnt信号转导通路中的关键分子,其可通过影响相关靶基因参与肿瘤发生、发展及转移.β-catenin为肿瘤生物学和肿瘤治疗学以及在调节肿瘤细胞对电离射线的敏感性作用研究的一个重要靶点.方法 应用RT-PCR技术,扩增出目的基因β-catenin,经胶回收纯化后亚克隆至pGEM-T载体中,挑选阳性克隆,经PCR、kpnⅠ和xbaⅠ双酶切、测序鉴定确认后,将目的基因β-catenin与含Hygromycm B抗性基因的真核表达载体pcDNA 3.1 (+)/Hygro连接,构建含目的基因的真核表达载体pcDNA3.1/β-catenin,并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α；经PCR、kpnⅠ和xbaⅠ双酶切和测序鉴定确认后,胶回收纯化pcDNA3.1/β-catenin载体；用FuGENE HD转染试剂将纯化的pcDNA 3.1/β-catenin真核表达载体转染到鼻咽癌CNE-2细胞,经Hygromycm B筛选,并用RT-PCR和Western blot检测重组体在CNE-2细胞的表达.结果 PCR、双酶切及测序鉴定表明,真核表达载体pcDNA 3.1/β-catenin构建成功；RT-PCR和Western blot检测表明,被转染的鼻咽癌CNE-2细胞能够高表达目的基因β-eatenin.结论 成功构建真核表达载体pcDNA 3.1/ β-eatenin,并能在转染的CNE-2细胞中进行目的基因的高表达,为进一步探讨β-catenin在鼻咽癌的生物学活性和对射线敏感性调节的作用提供了实验研究模型.
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