【摘 要】
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为了获得芽孢杆菌源纤维素酶基因,以用于构建相关的高效表达载体,从而能够得到高活性的纤维素酶.本研究根据GenBank中已报道的芽孢杆菌的纤维素酶设计一对特异性引物,对芽孢杆菌基因组DNA进行PCR扩增,将克隆到的产纤维素酶的目的基因片段切胶回收后,与pMD 18-T载体在16℃连接12小时,并转入制备好的大肠杆菌DH5α感受态细胞,然后在含有(X-Gal/IPTG/Amp)的LB培养基上37℃培养
【机 构】
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河南科技大学宏翔发酵饲料实验室,洛阳,471003 河南省动物疫病与公共安全院士工作站,洛阳,47
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会
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为了获得芽孢杆菌源纤维素酶基因,以用于构建相关的高效表达载体,从而能够得到高活性的纤维素酶.本研究根据GenBank中已报道的芽孢杆菌的纤维素酶设计一对特异性引物,对芽孢杆菌基因组DNA进行PCR扩增,将克隆到的产纤维素酶的目的基因片段切胶回收后,与pMD 18-T载体在16℃连接12小时,并转入制备好的大肠杆菌DH5α感受态细胞,然后在含有(X-Gal/IPTG/Amp)的LB培养基上37℃培养过夜(12～14h)后,在LB培养基上筛选出白色菌落,并接种于5mL LB培养基(含有氨苄青霉素)中,37℃振荡培养18h后,再用试剂盒进行重组质粒的提取,经过重组质粒PCR鉴定后进行测序,并对测序结果进行序列分析和同源性比较.结果表明从实验室保存的30多株产纤维素酶的芽孢杆菌中筛选出的一株菌B.LXX 12,PCR扩增出一个大小约1500bp的片段,测序结果也证明该扩增产物是一个包含完整ORF框的基因,同源性比较结果表明与枯草芽孢杆菌源的纤维素酶基因的同源性为98.9％.本研究关于芽孢杆菌纤维素酶基因的克隆及序列分析,对高产的纤维素酶具有重要的指导意义,纤维素酶在农业、工业、食品、畜牧业等各个领域都有巨大的用途,具有广阔的发展前景.本研究意在用分子生物学的方法克隆出纤维素酶基因,测序分析,为进一步实现纤维素酶的高效表达奠定基础.
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