腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷酸代谢的关键酶,它能催化腺嘌呤核苷生成次黄嘌呤,最终氧化成尿酸排出体外。该酶也与免疫有关,腺苷脱氨酶过多能引起红细胞中腺嘌呤衍生物含量降低,造成溶血性贫血。腺苷脱氨酶抑制剂可调节胞内腺苷及脱氧腺苷水平,影响淋巴细胞的生长和功能,并且能提高腺苷类似物的治疗效果。本研究旨在筛选和分离高活性的天然腺苷脱氨酶抑制剂,为开发腺苷类药物的保护剂和相关治疗药物提供基础。1.腺苷脱氨酶抑制活性的材料筛选。通过对食药两用植物和微生物的大量筛选,发现大豆乳清废水和荔枝果皮等提取液有较强的ADA抑制活性。对这两种提取物中的腺苷脱氨酶抑制剂进行了分离纯化,鉴定了3种腺苷脱氨酶抑制活性物质。2.大豆乳清废水中腺苷脱氨酶抑制剂的分离。通过有机溶剂萃取、大孔吸附树脂与硅胶柱层析等方法对大豆乳清废水中的腺苷脱氨酶抑制剂进行分离。用半制备HPLC纯化和LC-MS检测后,确定活性物质的结构。大豆乳清废水原液经大孔~树脂吸附,用水和不同浓度的乙醇梯度洗脱,分别在高极性和低极性洗脱相中检测到ADA抑制活性。将两个组分中的活性成分分别分离纯化,鉴定为染料木苷和染料木素。3.荔枝果皮提取物中ADA抑制剂的分离。荔枝果皮的花青素提取物经HPLC分析,有两个主要的成分。用半制备HPLC将两个主要成分离,分别鉴定为矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷。前者无ADA抑制活性,后者有较强的ADA抑制活性。4.大豆乳清废水提取物中ADA抑制剂含量的测定。将大豆乳清废水浓缩到1/10体积,再用乙酸乙酯萃取三次,有机相浓缩后烘干至恒重。HPLC法测定粗提取物中染料木苷、染料木素、大豆苷元和黄豆苷的含量分别为:0.04%、0.46%、2.5%和0.36%。