真核基因在大肠杆菌细胞非融合可溶性高效表达

来源 :2003年全国生化与生物技术药物学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouxiaoqing1003
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目前,以大肠杆菌为宿主的表达体系是外源蛋白的首选体系,其遗传背景清楚,繁殖快,成本低表达量高,易于操作.本文重点对真核基因在大肠杆菌细胞非融合可溶性高效表达进行了研究.
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两头尖为毛茛料植物多被银莲花的根茎.本实验以两头尖中分离得到多种三萜化合物,发现其中三种化合物对几种刺激剂诱导的人中性粒细胞的过氧化物产生具有不同影响作用.
目的:研究黄杨叶水溶性成分的提取和活性.方法:用常规提取技术分离黄杨叶水溶性成分.结果:黄杨叶除富含生物碱外,其醇浸膏、糖类有抑菌活性,黄酮类对单纯疱疹病毒有抑制作用.结论:黄杨属植物的非生物碱成分应深入系统研究.
目的:研究复方南瓜粉对糖尿病小鼠的药理作用.方法:以四氧嘧啶法建立病理模型,观察空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、胰岛素水平、体重变化及肾脏病理改变等项指标,综合评价生存质量.结果:实验组FBG,PBG显著降低(P<0.01),胰岛素水平提高(P<0.01),对肾脏有积极的保护作用.结论:复方南瓜粉能显著改善糖尿病小鼠的生命质量,抑制糖尿病肾病的发生.
为了研究细胞悬浮培养过程中紫杉醇的生物合成,在改良Gamborgs B5培养液中加入红豆杉内生真菌诱导子,对本实验室诱导筛选的东北红豆杉B10细胞系进行悬浮培养.结果发现,在红豆杉内生真菌诱导子的作用下,细胞内紫杉醇的含量大幅度提高,其中真菌诱导子F3的诱导作用最强,且在浓度为0.04mol/L时细胞内紫杉醇的含量达到最高,因此表明红豆杉内生真菌诱导子对紫杉醇的生物合成具有明显的促进作用.
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员小鼠骨髓干细胞治疗糖尿病的可行性及机制.方法:四氧嘧啶法复制糖尿病小鼠模型后,scG-CSF 20μg·kg·d,共注射5d.给药d7、d20、d50后处死小鼠,测定血糖和尿糖,HE染色光镜观察胰腺组织结构.分离雄性健康小鼠原代骨髓干细胞,对雌性糖尿病小鼠进行胰腺实质内定点注射移植50μl(10/ml),15d后处死,测定尿糖,取胰腺、肝、脾、骨髓,分
目的:研制一种能把药物定向导入肝脏组织的肝靶向药物载体.方法:用还原氨化法合成乳糖-赖氨酸(Lac-Lys)共价结合物作为靶向药物载体.离子交换层析分离后用红外光谱法确定其结构.采用含HBV反义x基因的质粒DNA经DH5α菌扩增,提取质粒后在一定条件下与乳糖-赖氨酸制成复合物转染料HepG2(2.2.15).用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中的HBsAg,观察不同浓度、不同作用时间
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质粒上的6His,在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到胰蛋白原B,在复性液中复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B.然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B 110mg/L
目的:探讨将人核糖核酸酶抑制因子(RI)基因转染到C57/BL纯系小鼠骨髓造血细胞中使其过表达,从而通过抑制血管生长因子(Ang)的活性来抑制肿瘤血管生成达到抑制肿瘤的生长的可行性.方法:用逆转录病毒感染小鼠骨髓造血细胞,体外分析病毒的转染效率;将阳性细胞移植给致死剂量钴60照射的小鼠体内,观察移植的细胞在体内表达情况和对小鼠黑色素瘤生长情况的影响.结果:体外逆转录病毒对小鼠骨髓造血细胞的转染效率
白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)是由抗原呈递细胞产生的、具有多种免疫调节作用的细胞因子.IL-12最主要活性是诱导自然杀伤细胞(NK细胞)和T细胞产生γ-干扰素(IFN-γ),增加NK细胞的杀伤能力以及细胞毒T细胞的特异性细胞毒活性.IL-12可作为治疗药物以内原性抗原的佐剂形式促进肿瘤或病毒特异性免疫,抑制肿瘤生长或治疗病毒感染.如果作为外原性抗原的佐剂,IL-12可
目的:构建艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)的融合基因表达质粒,观察其在痘苗病毒中共表达结果,研究其意义.方法:利用基因重组技术,将IFNα-2b基因片段插入到env基因的nt8383位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选,挑出重组痘苗病毒.经免疫荧光、Western blot和Dot-ELISSA鉴定表达产物.如果:间接免疫荧光实验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光.