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目的:调节性B细胞是体内发挥负向免疫调节功能的一类重要免疫细胞,其功能主要部分地通过分泌IL-10来实现,而目前在小鼠中CD5+CD1dhi B细胞是被报导最多的一群Breg细胞.利用CD19-Cre和PPAR-γ-Loxp小鼠杂交,获得选择性在B细胞内敲除PPAR-γ的小鼠,研究PPAR-γ敲除后对Breg的影响.
方法:分离PPAR-γ敲除鼠与对照鼠的脾细胞、腹腔细胞,LPS+PIM激活5、20h后,流式细胞仪检测Breg及相关亚群IL-10的表达;LPS激活脾细胞24h-48h后,应用流式细胞仪检测Breg及其它B细胞亚群CD86、Annex-V的表达.
结果:LPS+PIM刺激5h后,PPAR-γ敲除鼠脾脏CD19+CDS+CD1dhi Breg细胞亚群IL-10表达比对照鼠明显降低,而CD19+CD5+CD1dlow、CD19+CD5neg B细胞亚群之间IL-10表达无显著差异;同时PPAR-γ敲除鼠与对照鼠相比腹腔CD19+B细胞IL-10表达降低。此外,LPS刺激48小时后,PPAR-γ敲除鼠CD19+CD5+CD1dhi Breg细胞群Annex-V表达比对照鼠Breg亚群显著升高;而CD19+CD5+CDldlow、CD19+CD5neg B细胞亚群之间凋亡对比无显著差异。CD86分子也与Breg免疫抑制功能相关,但其在LPS刺激24后三个B细胞亚群中均高表达,并且在PPAR-γ敲除鼠与对照鼠之间无差异。
结论:上述结果表明B细胞条件敲除PPAR-γ后,其CD5+CDldhi Breg IL-10分泌减少,凋亡数目增加,这与课题组已观察到PPAR-γ敲除后小鼠整体免疫调节功能下降一致;可能是导致PPAR-γ敲除后B细胞免疫调节功能改变的机制之一。