【摘 要】
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目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达.方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-
【机 构】
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吉林医药学院检验学院临床生物化学检验研究室,吉林吉林132013 吉林大学药学院生物医学工程研究室
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目的:构建重组人Bikunin结构域Ⅰ(rhBikunin dominⅠ)真核表达载体,并检测在毕赤酵母X-33中的表达.
方法:将含有人Bikunin dominⅠ(hBikunin dominⅠ)的质粒为模版,通过PCR的方法扩增所需的DNA目的片段,与毕赤酵母表达载体pPICZαC相连接,构建重组质粒pPICZαC-hBikunin domainⅠ,DNA的测序分析.然后重组线性质粒电转化X-33毕赤酵母感受态细胞,经PCR、活力以及SDS-PAGE鉴定分析表达产物.
结果:测序正确,琼脂糖凝胶电泳结果显示在162bp处出现目的条带,胰蛋白酶抑制活力测定确定rhBikunin domainⅠ具有活力,SDS-PAGE鉴定在6000处出现蛋白条带.
结论:本研究在毕赤酵母X-33中成功地重组表达hBikunin dominⅠ.
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