基因组编辑技术作为一种定点改造基因组DNA的方法,已广泛的应用于各类研究对象中。蛋白质精氨酸转移酶5(Prmt5)是一类Ⅱ型酶,能够催化形成对称的二甲基化精氨酸,在小鼠胚胎发育、细胞周期调控和免疫等方面发挥着重要作用。斑马鱼prmt5的敲降影响其肌肉发育[1]。本研究以青鳉和斑马鱼为实验材料,利用TALEN和CRISPR/Cas9技术,成功进行了青鳉和斑马鱼prmt5基因的突变,进行了子代筛选,将为进一步研究prmt5功能打下基础。首先,运用TALEN技术进行了青鏘和斑马鱼prmt5的突变。利用“单元重组法”分别成功构建了青鳉和斑马鱼prmt5的TALEN载体,合成其TALEN mRNA。通过显微注射技术,成功获得F00代。青鳉、斑马鱼TALEN F0代突变效率分别为40%和45%。从20条青鳉TALEN F0代中筛选到7条F0突变体,突变效率为35%。将其中的4条突变体与野生型交配,其胚胎突变效率分别为15%、22%、20%和44.4%。剪取F1代成鱼尾部,测序检测突变体。其中FounderB有同一位置突变的突变体共4条:F1自交胚胎突变率为5%。Founder I同一位置突变的突变体共5条,自交后,F2代突变率为47.3%。Founder B的F2代成鱼突变体为41.7%,而Founder I的F2代成鱼突变体为16.7%。尚需进一步筛选纯合子。30条斑马鱼TALENF0代中共筛选到2条F0突变体,突变频率为6.7%。接着,运用了 CRISPR/Cas9技术进行了青鳉、斑马鱼prmt5基因的突变工作。首先成功构建116 bP的gRNA质粒载体。体外转录合成Cas9 mRNA及gRNA。通过显微注射,成功获得F0代。青鳉、斑马鱼CRISPR/Cas9 F0代胚胎突变效率分别为30%、0%。从43条青鳉CRISPR/Cas9 F0代筛选到18条F0代突变体,效率为41.9%。将其中10种突变体分别与野生型个体测交,F1代突变效率分别为0、36.8%、30%、30%、12.5%、10%、12.5%、22.2%、16.7%、12.5%。目前需要利用T7EI和测序结合的方式进一步验证以获得纯合子,为后面利用高通量转录组技术等分析prmt5功能的研究提供保障。