目的探讨开结汤对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的干预作用及开结汤改善肾纤维化炎症状态的机制。方法在预实验成功的基础上,选取SPF级SD雄性大鼠70只,按照体重随机分为正常组(10只)和造模组(60只)。造模组灌服腺嘌呤混液250mg/(kg·d),每日灌胃1次,连续灌胃21天后随机分为5组:模型组、开结汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、尿毒清组,治疗4周。末次灌胃后放入代谢笼,收集24h尿液离心提取上清液。麻醉大鼠,在心尖处取血5ml,离心提取血清。取肾脏,观察肾脏的大小、质地和颜色,置4%多聚甲醛液中固定。采用酶促动力法检测血Urea和Scr;免疫比浊法检测24hUP;ELISA法测定尿α1-MG。HE染色观察肾组织病理改变;Masson染色观察胶原沉积;免疫组化法检测E-cadherin、α-SMA在各组大鼠肾组织中的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western Blot;WB)和实时荧光定量核酸扩增(Real-time Quantitative PCR,qPCR)技术,分别检测wnt1、wnt4、β-catenin、MMP-7、c-Myc、ColⅠ在大鼠肾组织中的表达。结果1.组织病理改变的影响(1)HE染色结果显示正常组大鼠肾组织未见病理改变,模型组可见大量深棕色结晶沉积于肾小管,肾小管结构被破坏,伴有大量炎性因子浸润,纤维化特别明显,肾小球明显萎缩,其球囊变大。经过4周药物治疗后,各治疗组的病理变化较模型组均得到明显改善。(2)Masson染色结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏胶原面积明显增多(P<0.01)。经过4周治疗后,与模型组比较,各治疗组大鼠肾脏胶原面积显著缩小(P<0.01)。2.血清Scr和Urea结果与正常组比较,模型组血清Scr和Urea的含量明显增高(P<0.05);经药物干预后,治疗组大鼠血清中Scr和Urea的含量明显降低(P<0.05)。3.24UP和尿α1-MG结果与正常组比较,模型组24UP和尿α1-MG的含量明显升高(P<0.05);经药物干预后,各治疗组大鼠24UP和尿α1-MG的含量明显降低(P<0.05)。4.免疫组化结果与正常组比较,模型组大鼠肾组织中E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.01);经药物干预后,与模型组相比,开结汤高剂量组及尿毒清组大鼠肾组织中E-cadherin蛋白表达明显增多(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01);经药物干预后,与模型组相比,开结汤高、中剂量组、尿毒清组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达明显减少(P<0.05)。5.Western bolt结果与正常组比较,模型组wnt1、wnt4、β-catenin、MMP-7、c-Myc、ColⅠ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),经药物干预后,各治疗组中,开结汤高剂量组、中剂量组、尿毒清组wnt1、β-catenin、ColⅠ蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01);开结汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、尿毒清组wnt4、MMP-7、c-Myc蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。6.qPCR检测结果与正常组比较,模型组wnt1、wnt4、β-catenin、MMP-7、c-Myc mRNA表达水平显著升高(P<0.01);经药物干预后,开结汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、尿毒清组wnt1、wnt4、MMP-7、β-catenin、c-Myc mRNA表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:1.开结汤可以改善腺嘌呤所致肾纤维化大鼠肾炎症状态,对肾脏具有一定的保护作用。2.开结汤通过对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的干预作用,能够有效减轻肾纤维化损害,此效应存在一定的量效关系,其中以开结汤高剂量组、中剂量组效果最佳。