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研究背景邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]是最常见的邻苯二甲酸酯类,也是一种环境内分泌干扰物,DEHP具有部分雌激素的活性,可以导致雄性睾丸萎缩。研究证明雄性暴露DEHP会导致睾丸细胞发生凋亡,而以哪种途径诱发凋亡的研究尚不全面。先前体外细胞实验证明暴露于DEHP可以使细胞发生内质网应激,也有动物体内实验证明暴露DEHP可以使肾脏发生内质网应激,所以我们推测雄性暴露DEHP可以使睾丸组织发生内质网应激并诱发睾丸细胞凋亡,使睾丸萎缩。先前课题组发现了青春期小鼠暴露于某种金属会导致睾丸毒性并使精子质量降低,还会间接影响雄性生育力以及其后代胎仔的宫内生长发育。所以我们探究了这种现象是否同样适用于青春期雄鼠暴露于DEHP。研究目的探究青春期雄鼠暴露DEHP发生睾丸损害的潜在机制及其对生育力和子代宫内生长发育的作用。研究方法6周龄雄鼠平均分为四组,对照组灌胃玉米油,其他剂量组分别灌胃0.5,50和500mg/kg的DEHP,连续给药35天,经过交配后恢复性喂养9天,剖杀称取睾丸和附睾的重量,切碎附睾作精子计数。用苏木素-伊红染色睾丸组织,镜下观察其形态以建立生殖毒性的模型。用TUNEL试剂盒检测睾丸细胞的凋亡情况,Western-blotting检测与内质网应激诱发凋亡途径中的相关蛋白表达水平。给药35天后的雄鼠按照1:1的比例与雌鼠合笼交配,连续交配5天,将孕鼠喂养至GD18,记录合笼期间的受孕的雌鼠与孕鼠喂养过程中的空怀与流产情况,计算雄鼠的交配成功率、受孕成功率和孕鼠的流产率,于GD18剖杀孕鼠,记录胎仔的重吸收,死胎和活胎情况,记录活胎的体重与顶臀长和胎盘的直径与重量。用苏木素伊红染色胎盘组织,观察雄鼠暴露DEHP对孕鼠的胎盘和胎鼠生长发育的作用。结果(1)与对照组相比,青春期雄鼠暴露于500mg/kg/d的DEHP对睾丸和附睾的重量以及精子数量有明显影响(p<0.05),而对0.5和50mg/kg/d剂量组的指标则没有影响(p>0.05)。500mg/kg/d剂量组的IX-XII阶段的生精小管比例显著增多(p<0.05),而VII-VIII阶段的生精小管比例显著下降(p<0.05)。(2)500mg/kg/d剂量组的凋亡阳性细胞比例显著高于对照组(p<0.05)。睾丸中与凋亡有关的指标如裂解性Caspase-3的表达显著提高(p<0.05),Bcl-2的表达显著下降(p<0.05),DEHP对睾丸Bax的表达无影响(p>0.05)。(3)睾丸GRP78在500mg/kg/d剂量组中的表达显著下降(p<0.05)。睾丸p-IRE1α,p-JNK,CHOP在500mg/kg/d剂量组中的表达显著上升(p<0.05)。(4)暴露DEHP对雄鼠与雌鼠的交配成功率、雌鼠的受孕成功率无明显影响(p>0.05)。每个剂量组中孕鼠的流产率相比于对照组均无显著差异(p>0.05)。(5)每个剂量组孕鼠子宫内的吸收胎,死胎与活胎数相比于对照组无显著差异(p>0.05)。每个剂量组胎鼠的体重和顶臀长,孕鼠胎盘的重量和直径相比于对照组均无明显差异(p>0.05)。雄鼠暴露DEHP对孕鼠胎盘的结构无影响。结论DEHP可以引起睾丸组织发生内质网应激并诱导后续凋亡途径,可以使睾丸萎缩,精子数量下降。但是青春期暴露DEHP对于雄性的生育力无影响。对子代的出生结局以及宫内生长发育也无显著影响。这些发现阐明了DEHP处理对雄性生殖的影响及其潜在的机制,为继续深入研究DEHP对生殖的影响提供了新的思路和科学基础。