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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是影响全球猪业的最重要的传染病之一,该病的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)。由于PRRSV具有抗原变异性、嗜巨噬细胞性、抗体依赖性增强作用和持续性感染等特征,目前开发的商业PRRSV疫苗不能提供有效保护,至今仍无确实有效的防制措施。因此,开发能够针对不同PRRSV毒株提供广泛保护的通用抗病毒策略已成为当前PRRSV防控面临的主要挑战。microRNAs(miRNAs)是一类能够在转录后水平调控基因表达的内源性非编码小RNA,在宿主-病原体相互作用和免疫应答的复杂网络中发挥关键作用。课题组之前通过高通量测序发现PRRSV感染后,猪肺泡巨噬细胞(PAM)中的miR-c89表达上调。然而,miR-c89在PRRSV感染过程中的作用及其分子机制尚不清楚。本研究拟进一步验证PRRSV感染对miR-c89表达的影响,并阐明miR-c89在PRRSV感染过程的作用及其分子机制。本研究的主要工作和结果如下:1.PRRSV感染诱导PAMs中miR-c89上调表达应用qRT-PCR检测高致病性HP-PRRSV GD-HD毒株和经典N-PRRSV CH-1a毒株感染宿主靶细胞PAMs中miR-c89的表达水平。结果显示,HP-PRRSV和N-PRRSV感染均诱导了PAMs中miR-c89表达上调,表明PRRSV感染确实影响宿主细胞中miR-c89的表达。2.过表达miR-c89抑制PRRSV在PAMs中的复制通过qPCR、western blot、TCID50等实验方法检测在HP-PRRSV或N-PRRSV感染PAM细胞前后,转染miR-c89模拟物对不同毒力PRRSV毒株复制的影响。结果显示,过表达miR-c89显著降低了PAM细胞内PRRSV ORF7基因的表达水平和细胞上清中病毒含量,证明在PRRSV感染前后,过表达miR-c89均能显著抑制不同毒力PRRSV毒株的复制,表明miR-c89是宿主细胞中抗PRRS病毒感染的重要因子。3.miR-c89直接靶向猪RXRB mRNA 3’UTR通过生物信息学预测,定点突变、双荧光素酶活性检测以及荧光定量PCR等实验技术验证了miR-c89和猪维甲酸X受体β(RXRB)之间的相互作用,证明了miR-c89能够特异性结合到其靶基因RXRB mRNA的3’UTR区。4.敲低RXRB抑制PRRSV复制通过qPCR、western blot、TCID50等实验方法检测siRNA介导的RNAi降低PAMs中RXRB的基础表达水平对不同毒力PRRSV毒株复制的影响。结果显示,敲低RXRB的表达显著降低了PAM细胞内PRRSV ORF7基因的表达水平和细胞上清中病毒含量,证明了降低PAMs中RXRB的基础表达水平,能够显著抑制高致病性PRRSV和经典PRRSV在PAMs中的复制。综上所述,本研究证明PRRSV感染可诱导PAM细胞miR-c89表达上调,miR-c89通过靶向RXRB抑制PRRSV复制。本研究从病毒与宿主细胞相互作用的角度,明确了PRRSV感染对宿主靶细胞中miRNA miR-c89表达的影响,阐明了宿主miR-c89对PRRSV感染的调控作用并初步探索了其调控PRRSV感染的分子机制。该研究结果不仅有助于更好的理解miRNA介导的PRRSV-宿主细胞的互作机制,也可为PRRSV防控提供新的分子靶点。