近年来，各国学者致力于寻找不明原因习惯性流产的易感基因，易感基因的筛选主要集中在与不明原因习惯性流产危险因素相关的基因上。研究表明，不明原因习惯性流产是由母体免疫因素异常引起，即母体免疫系统对胎儿抗原免疫识别低下或反应不足。现已知，机体内免疫反应主要由人类白细胞抗原(HLA)复合体内基因调控，并已发现HLA与许多免疫有关的疾病相关。因此，我们设想引起习惯性流产的免疫学因素可能受到HLA区域内或与HLA连锁的某基因所影响。本研究运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)，分析原因不明习惯性流产患者的HLA区域中TNF等位基因以及它与TNF水平的关系，本研究旨在探讨对TNF-α和TNF-β基因多态性与不明原因习惯性流产的关系，探讨它们和不明原因习惯性流产的发病有无相互作用，寻找基因—基因相互作用而产生不明原因习惯性流产的易感复合基因型。探讨不明原因习惯性流产患者TNF等位基因与TNF水平的关系，寻找不明原因习惯性流产的易感基因，从分子遗传学角度发现不明原因习惯性流产的高危人群，从而对人群进行筛选，早期对携带易感基因的人群给予干预措施，为找出个体化预防和治疗不明原因习惯性流产的方法提供理论基础。 材料与方法1研究对象：均为汉族人，各研究对象之间无血缘关系。不明原因习惯性流产组为临床确诊的习惯性流产患者50例，不明原因习惯性流产诊断标准依照全国统编教材妇产科学第6版，平均年龄31.4±5.5岁；孕周6～10周，平均孕周7.6周；孕次3～6次，平均孕次4次；排除解剖遗传、内分泌、感染、抗精子抗体阳性、ABO血型不合因素。对照组共50例，为年龄及孕周与不明原因习惯性流产组相匹配的正常妊娠妇女，无不孕、流产、死胎、死产史。所有研究对象均除外系统疾病。 2、人外周血白细胞DNA的提取：静脉血2ml，EDTA抗凝，采用美国Gentra公司的DNA抽提试剂盒，抽提基因组DNA。 3、TNFα-308G/A基因多态性的检测：参照文献设计引物，PCR扩增TNFα-308G/A基因后的产物长度为116bp，产物用NcoI限制性内切酶酶切，用3.5％琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切后的产物长度。 4、TNF-βG252A基因多态性的检测：参照文献设计引物，PCR扩增TNF-βG252A基因后的产物长度为740bp，产物用NcoI限制性内切酶酶切，用1.5％的琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切后的产物长度。 5、血浆TNF水平测定取静脉血2ml，注入含10％依地酸二纳(EDTA)30ul，在4℃下离心10min，取血浆置-20℃保存至同批测定。放免法测量血浆TNF水平(试剂盒由北京北免东雅生物技术研究所提供)。 6、统计学分析：用SPSS11.5统计软件进行分析，计量资料组间比较用独立样本t检验、配对t检验，计数资料组间比较用χ2检验。 结果：1、血浆中TNF水平，不明原因习惯性流产组明显高于对照组，两组之间比较差异有显著性意义(P＜0.05)。 2、TNFα-308G/A基因多态性与不明原因习惯性流产的关系：不明原因习惯性流产组与正常对照组之间TNFα-308G→A突变无显著差异(p＞0.05)。 3、不明原因习惯性流产组与对照组TNFα-308G/A基因三种基因型携带者组间血浆TNF水平比较无显著性差异(p＞0.05)。 4、TNFTNF-βG252A基因多态性与不明原因习惯性流产的关系：不明原因习惯性流产组*2/*2和1*/2*基因型频率较对照组增加，而*1/*1基因型频率较对照组则减少；不明原因习惯性流产组TNFβ2*基因频率较对照组增加，TNFβ1*基因频率较对照组减少；但只有*1/*1基因型、TNFβ1*和TNFβ2*基因频率的差异有统计学意义。 5、不明原因习惯性流产组与对照组TNF-βG252A基因三种基因型携带者组间血浆TNF水平比较无显著性差异。 6、TNFα-308G/A和TNF-βG252A复合突变与不明原因习惯性流产的关系：TNFα-308G/A和TNF-βG252A的复合基因型TNFα1*/1*TNFβ1*/1*在不明原因习惯性流产组较对照组明显降低，差异有显著性差异(p＜0.05)，TNFα-308G/A和TNF-βG252A的其他复合基因型在不明原因习惯性流产组和对照组之间无显著性差异。 结论：1、不明原因习惯性流产组血浆TNF水平明显高于对照组。 2、TNFα-308G/A基因多态性与不明原因习惯性流产无显著相关，TNF-βG252A基因多态性与不明原因习惯性流产有显著相关。 3、TNFα-308G/A和TNF-βG252A各复合基因型在不明原因习惯性流产组和对照组之间的分布无显著性差异。