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目的:利用双重特异性酪氨酸调节激酶1B(Dyrk1B)抑制剂AZ191处理卵巢癌细胞,观察其对卵巢癌细胞增殖、凋亡及周期的影响,以初步探讨AZ191在调节卵巢癌凋亡及增殖周期中的作用及其在分子靶向治疗中的意义。方法:(1)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度和时间AZ191对卵巢癌细胞OVCAR3和OV2008增殖活力的影响。(2)细胞克隆形成实验检测AZ191对卵巢癌细胞增殖能力的影响。(3)应用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测AZ191对卵巢癌细胞凋亡的影响。(4)流式细胞仪Propidium Iodide(PI)单染法检测AZ191对卵巢癌细胞增殖周期的影响。(5)蛋白印迹法检测AZ191对卵巢癌细胞凋亡及周期关联蛋白的影响。结果:(1)MTT比色法检测显示,不同浓度(0、1、2.5、5、10μM)AZ191分别作用于OVCAR3和OV2008细胞24h、48h和72h后,细胞存活率明显下降,呈时间和浓度依赖性改变,AZ191作用各时间点(24h、48h、72h)的IC50分别是OVCAR3:9.78μM、6.08μM、5.46μM;OV2008:9.05μM、5.47μM、3.00μM。(2)AZ191分别作用于OVCAR3和OV2008细胞2周后,实验组(5μM)较对照组(0μM)细胞克隆群落显著减少,二者比较有统计学意义(P<0.05)。(3)用0、5和10μM浓度AZ191作用OVCAR3和OV2008细胞48h后,诱发OVCAR3和OV2008细胞凋亡率显著增加,与对照组(0μM)比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且细胞凋亡呈浓度依赖性改变。(4)AZ191(0、5、10μM)作用于OVCAR3细胞48h后,随药物浓度升高,细胞凋亡相关蛋白PARP裂解片段表达增多,并伴随着Bcl-2家族促凋亡蛋白Bim和DNA损伤通路蛋白p-H2AX、p-CHK2表达增加。(5)流式细胞技术检测AZ191(0、5、10μM)作用于卵巢癌细胞48h后,随药物浓度升高出现G2/M期比例增加,并伴随G0/G1和S期降低,并呈浓度依赖性改变。同样,蛋白印迹法检测不同浓度(0、5、10μM)AZ191作用于OVCAR3和OV2008细胞,周期相关蛋白cyclinB1和cyclinD1表达升高、P27kip1表达降低。结论:Dyrk1B抑制剂AZ191明显抑制卵巢癌细胞增殖和克隆形成,且其抑制作用呈时间及浓度依赖性。另外,AZ191可诱发卵巢癌细胞细胞凋亡和G2/M期阻滞,且呈浓度依赖性改变。同时,AZ191可引起凋亡相关蛋白PARP裂解片段增多,Bim表达升高及DNA损伤调节蛋白p-H2AX和p-CHK2表达的增加,以及细胞周期调节蛋白cyclinB1、cyclinD1、P27kip1改变。本文结果提示Dyrk1B抑制剂AZ191参与调节卵巢癌细胞的凋亡和周期阻滞,其作用可能与BCL-2家族、ATM/CHK2途径以及细胞周期调节有关,说明该基因有望成为临床治疗卵巢癌的新靶点。