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背景与目的:肺癌是最常见的恶性肿瘤,目前临床上诊断肺癌的方法很多,但是在筛查、治疗、及预后判断上仍存在不足。肿瘤标志物在肺癌早期诊断治疗所具有的优势以及肿瘤标志物对高危人群筛查具有重要的潜在价值,引起了研究者的广泛关注。由于单一肿瘤标志物对癌症检测的敏感性及特异性不高,肿瘤标志物的联合检测成为一种研究趋势,因此寻找新的肿瘤标志物成为一大热点。目前,自身抗体为肿瘤的诊断提供了新的途径。本研究旨在探讨非小细胞肺癌患者血清中DKK-1自身抗体潜在的临床应用价值。方法:通过RT-PCR从肺腺癌系A549中获得DKK-1的cDNA;克隆到pGEM -TEasy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30a(+)中,在E.coli Rosetta(DE3)实现蛋白表达;确定重组DKK-1蛋白在细胞内的表达形式及部位;亲和层析方法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳及蛋白质斑迹法(Western blot)鉴定表达产物;应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法对97例非小细胞肺癌患者、38例健康志愿者血清中DKK-1自身抗体进行检测;并用Western blot去检测非小细胞肺癌患者血清中DKK-1自身抗体。结果:经酶切、测序鉴定证实pET30a(+)/DKK-1表达载体构建成功;在1.0mmol/L的IPTG浓度下,能顺利诱导出目的蛋白;重组DKK-1蛋白在E.coli Rosetta(DE3)中以包涵体形式表达;Western blot证实非小细胞肺癌患者血清中存在DKK-1自身抗体;间接ELISA方法检测血清中DKK-1自身抗体,其检测结果显示DKK-1自身抗体在NSCLC患者血清中的含量与健康志愿者存在统计学意义上的差异,P< 0.05,DKK-1自身抗体检测的敏感性为34.0%,特异性为84.2% ;DKK-1自身抗体与非小细胞肺癌患者有无远处转移存在相关性(P<0.05);此外,DKK-1自身抗体和肿瘤标志物CEA联合检测的阳性率明显高于CEA与ProGRP、CYFRA、NSE、SCC进行联合检测的阳性率。结论:该研究成功构建人源DKK-1原核表达载体,并成功表达和纯化目的蛋白;运用间接ELISA方法对非小细胞肺癌患者血清中的DKK-1自身抗体进行检测,DKK-1自身抗体与肿瘤远处转移存在相关性,并在联合检测中显示出重要作用,这为DKK-1自身抗体在非小细胞肺癌诊断、治疗、预后判断等临床应用方面奠定了基础。