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本研究首次利用454测序方法获得了家蝇转录组数据,为研究家蝇抗逆机制提供了重要信息。根据家蝇转录组数据鉴定了7条与抗逆相关的基因,包括1种热休克蛋白70基因(MdHSP70-1),2种金属硫蛋白基因(MdMTl, MdMT2),3种超氧化物歧化酶基因(MdSOD1, MdSOD2, MdSOD3)以及1种硫氰酸生成酶样蛋白基因(MdRhodlike1),通过qPCR、RNAi、重组表达、细胞转染、Western等技术对这些基因进行了功能研究,主要研究结果如下：1.通过454测序获得了249555条ESTs序列(平均长度为373bp)；这些序列经过生物信息组装成13206条Contig和20556条Singleton;通过核酸序列搜索Swissprot和Nr数据库蛋白,确定4814条Contig和8166条Singleton为独立序列(unique sequence);通过GO分析将注释序列进行了分类,KEGG分析将2164条unique sequence定位到184条KEGG通路上2.通过qPCR技术,对这7个基因在热激,重金属Cd2+刺激以及细菌感染3个胁迫条件下分别进行了基因定量分析。在42℃高温下,MdMT2首先在热激1h时出现高峰,其余基因在热激后恢复1h时到达高峰；在Cd2+刺激时,MdMT1和MdMT2在10mM Cd2+处理12h出现峰值,除MdRhodlike1基因表达模式无规律性外,其余基因在30mM Cd2+处理24h时mRNA表达水平较高；革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性大肠杆菌感染幼虫24h时,MdHSP70-1和MdRhodlike1的mRNA表达水平出现峰值,其余基因在感染60h时mRNA表达水平最高。这些结果展现了这7个基因在不同环境刺激时的应答表达变化模式。3.运用RNA干扰技术成功敲低抗逆基因,受到干扰敲低的家蝇幼虫群体在应对高温、Cd2+和细菌感染的胁迫时,存活率明显下降,实验结果提示这些基因在家蝇抵抗外界胁迫的过程中具有重要的作用。4.运用原核表达系统进行体外重组表达,分离纯化得到了具有酶活的rMdSOD2,为进一步研究MdSOD2的功能奠定了基础。5.利用真核载体成功将MdSOD2和MdRhodlike1转染昆虫SF9细胞,初步推测家蝇MdSOD2和MdRhodlike1基因为细胞质表达。6.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统和Western技术,在SF9细胞中对MdMT1、 MdSOD2和MdRhodlike1进行了重组表达和检测。