艾灸胃经穴调节应激性胃溃疡大鼠胃黏膜细胞增殖与凋亡相关蛋白的实验研究

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目的:通过观察艾灸足三里、梁门(穴位)对应激性胃溃疡大鼠的胃黏膜损伤情况、胃组织HE染色形态学情况以及胃组织中细胞增殖与凋亡相关信号蛋白MAPK1、pERK2、PI3K、AKT、PAK1与TNF-α、Apaf-1、Caspase-3表达的影响,讨论艾灸在胃黏膜损伤修复过程中的信号转导机制,为艾灸在临床治疗胃黏膜疾病的应用提供实验依据。  方法:40只大鼠随机分为空白组、模型组、胃经穴组和对照点组,采用束缚冷应激法(WRS)制作应激性胃溃疡大鼠模型,肉眼观测大鼠胃黏膜损伤程度,按Guth标准记录大鼠胃黏膜损伤指数;光镜下观察胃组织HE染色形态学变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞凋亡信号通路中的肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)、胱天蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specificproteinase,Caspase-3)、凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic ptotease activatingfacter-1,Apaf-1)和细胞增殖相关信号通路中的丝裂原激活蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase1,MAPK1)、磷酸化细胞外信号调节(TypeⅠtransmembrane ER-resident protein kinase2,pERK2)、磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinaseB,PKB/AKT)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PAK)的表达。  结果:1.应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤肉眼观察  空白组大鼠胃组织黏膜非常完整,偶见浅表的溃疡;模型组大鼠胃组织黏膜出现多处缺损,可见明显的斑点状、线状或带状糜烂、溃疡、瘀血;艾灸胃经穴组大鼠胃组织黏膜较为完整,未见缺损,可见少量点状瘀血或浅表溃疡形成;艾灸对照点组大鼠胃黏膜皱襞少处缺损,可见点状、线状糜烂和多处溃疡形成。  2.胃黏膜损伤指数(UI)  胃黏膜损伤指数(UI)按Guth法计算得到如下结果:①在应激性胃溃疡造模后,空白组大鼠胃黏膜损伤指数记分最低,而模型组大鼠与之相比UI值明显升高,两组间差异有统计学意义(P<0.05),说明此造模方法较为成功;②与模型组比较,艾灸胃经穴组和对照点组大鼠胃黏膜损伤指数均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),说明艾灸胃经穴组和对照点组都可以降低UI值,促进胃黏膜损伤的修复;③与对照点组比较,胃经穴组大鼠胃黏膜损伤指数值降低,差异有统计学意义(P<0.05),说明艾灸胃经穴效应相对强于艾灸非穴位。  3.镜下观察胃组织HE染色形态学变化  与空白组相比,模型组大鼠胃黏膜层断裂破坏,可见细胞大量坏死,排列无序,胞核胞质模糊,细胞内见充血水肿,毛细血管增生及出血,胃黏膜下可见大量炎性细胞浸润;与模型组比较,胃经穴组大鼠胃黏膜层虽有断裂破坏,但面积较小,上皮表层未见明显炎性细胞浸润,胃腺已基本愈合;对照点组大鼠胃黏膜上皮区和部分胃腺表面缺损,但破损情况没有模型组大鼠严重,未见毛细血管增生及出血,可见少量炎性细胞。  4.胃黏膜组织中增殖相关MAPK1、pERK2、PI3K、AKT、PAK1的表达  与模型组相比,胃经穴组和对照点组大鼠胃黏膜细胞中增殖相关的信号蛋白MAPK1、pERK2、PI3K、AKT、PAK1表达显著升高(P<0.05或P<0.01);与对照点组比较,胃经穴组大鼠胃黏膜细胞中MAPK1、pERK2、PI3K、AKT、PAK1表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。  5.胃黏膜组织中凋亡相关TNF-α、Apaf-1、Caspase-3的表达  与空白组比较,模型组和对照点组大鼠胃黏膜细胞TNF-α、Apaf-1、Caspase-3表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,胃经穴组、对照点组大鼠胃黏膜细胞TNF-α、Apaf-1、Caspase-3表达显著下降(P<0.01);与对照点组比较,胃经穴组大鼠胃黏膜细胞TNF-α、Apaf-1、Caspase-3表达显著下降(P<0.01),表明艾灸胃经穴能降低应激性胃溃疡大鼠胃黏膜细胞TNF-α、Apaf-1、Caspase-3的表达,且艾灸胃经穴效应强于艾灸非穴位,说明艾灸具有腧穴特异性。  结论:1.艾灸足三里、梁门穴位能够明显改善应激性胃溃疡大鼠胃黏膜组织形态学损伤,降低胃黏膜损伤指数UI值,提示艾灸足三里、梁门穴位对应激性胃溃疡导致的胃黏膜损伤具有修复功效。  2.艾灸足三里、梁门穴位可以提高增殖相关的MAPK1、pERK2、PI3K、AKT、PAK1的含量表达,诱导胃黏膜损伤后的增殖修复。  3.艾灸足三里、梁门穴位可以降低细胞凋亡相关的TNF-α、Ap af-1、Caspase-3的含量表达,具有抑制胃黏膜损伤后的细胞凋亡的作用。  4.艾灸足三里、梁门穴位从统计学上分析,疗效优于艾灸对照点组,说明艾灸具有腧穴特异性,且存在经脉,脏腑相关。
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