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系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是一种多基因遗传疾病,好发于育龄女性,是以B淋巴细胞高度活化,产生多种自身抗体而导致组织损害为特征的自身免疫性疾病,主要损害皮肤、肾脏、关节、中枢神经系统、血液系统等,受累脏器出现免疫复合物沉积及各种白细胞浸润,引起一系列炎症反应,并最终导致多系统多脏器损害。SLE的发病机制复杂,至今仍未完全阐明。近年研究表明,SLE的发病过程中存在T细胞亚群失衡和细胞因子网络失衡,但各细胞亚群在发病机制中的作用尚无统一认识。辅助T细胞1（Th1）、辅助T细胞2（Th2）及调节性T细胞中的“CD4+CD25+Treg”可以代表机体复杂的细胞因子网络,从整体上对机体的免疫状况进行评价。Th1、Th2和Treg及其相互之间的平衡在免疫应答的调节中起着关键作用,并且在T细胞亚群分化过程中,转录因子具有重要的调节作用。转录因子T-bet、GATA3和FOXP3分别特异性地表达于Th1、Th2和CD4+CD25+Treg。目前国内外关于转录因子T-bet、GATA3和FOXP3三者在免疫性疾病作用的研究还很少,所以我们检测了SLE患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中转录因子T-bet、GATA3和FOXP3mRNA的表达水平,并与正常人群做比较分析,探讨T-bet、GATA3和FOXP3在SLE发病机制中的作用。材料和方法1.研究对象收集2007年7月至2008年2月在我院门诊和住院的患者87例,活动期50例,非活动期37例,其中男性10例,女性77例,年龄10～48岁,平均30.5±2.7岁。所有患者的诊断均符合美国风湿病学会1982年修订的SLE诊断标准。入选的SLE患者按SLE疾病活动指数（SLE disease active index,SLEDAI）评分、肾脏损害关节损害血清抗dsDNA水平和入组前有无接受糖皮质激素治疗情况分组,小于10分者为非活动期（37人）,大于等于10分者为活动期（50人）,其中SLEDAI大于20分者为高活动期（13人）;正常对照组47人,均为女性,年龄24～37岁,平均29.2±2.2岁。2.实验方法（1） RNA的提取:抽取患者和对照组外周静脉血2 ml,密度梯度离心法分离PBMCs,提取总RNA,用分光光度计测定A260/A280比值,以判定RNA纯度。（2）逆转录合成cDNA。反应条件（10μl体系）:37℃15 min,85℃5 s。（3）根据β-actin、T-bet、GATA3及FOXP3基因序列设计特异性引物。β以β-actin（GenBan登录号:NM001101）作为内参照,引物为:Fw 5’CATGTACGTTGCTATCCAGGC3’,Rv5’CTCCTTAATGTCACGCACGAT3’,扩增目的片段长度为250 bp;T-bet（Gen Bank登录号:NM013351）引物为:Fw5’CAAGGGGGCGTCCAACAAT3’;Rv5’TCTGGCTCTCCGTCGTTCA3’;Rv5’GGTGGTCTGACAGTTCGCAC3’,扩增目的片段长度为102 bp;GATA3（Gen Bank登录号:NM002051）引物为:Fw5’TCACAAAATGAACGGACAGAACC3’;Rv5’GGTGGTCTGACAGTTCGCAC3’,扩增目的片段长度为100 bp。FOXP3（GenBank登录号:NM014009）引物为:Fw5’CTGCCCCTAGTCATGGTGG3’;Rv5’CTGGAGGAGTGCCT GTAAGTG3’,扩增目的片段长度为72bp。（4）普通PCR反应:反应条件:95℃3 min;95℃30 s,55℃30 s,72℃60 s,35个循环;72℃5 min。（5）琼脂糖凝胶电泳。（6）SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应:以β-actin为内参照,分别检测T-bet、GATA3和FOXP3 mRNA相对表达水平。反应条件（20μl体系）:预变性95℃10s,1个循环;PCR反应95℃5s,60℃30s,40个循环。（7）PCR产物分析:对所扩增的PCR产物融解曲线进行分析,验证β-actin、T-bet、GATA3和FOXP3的扩增效率相同。3.统计方法每一份标本的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应做3个重复管,取平均CT值计算。同一标本扩增不同基因得到的CT值分别标记为CTβ-actin,CTT-bet,CTGATA3和CTFOXP3,以ΔCT目的基因=CT目的基因-CTβ-actin计算得到ΔCTT-bet,ΔCTGATA3和ΔCTFOXP3。ΔΔCT=ΔCT实验组-ΔCT对照组,差别倍数=2-ΔΔCT。用2-ΔΔCT的方法分析比较各组的mRNA相对表达水平变化。结果1.SLE患者组GATA3 mRNA的表达水平是正常对照组的0.42倍,而T-bet和FOXP3 mRNA的表达水平与正常对照组无明显差异。但FOXP3的表达水平与SLEDAI呈负相关（r=-0.891,P=0.001＜0.01）。2.SLE患者活动期GATA3 mRNA的表达水平是正常对照组的0.42倍,稳定期的是正常对照组的0.37倍;而T-bet和FOXP3 mRNA表达水平在这三组中无明显差别。3.肾损害组GATA3 mRNA的表达水平是正常对照组的0.52倍,无肾损害组是正常对照组的0.32倍;而T-bet和FOXP3 mRNA的表达水平在三组间的表达无明显差异。4.关节损害组GATA3 mRNA表达水平为正常对照组的0.48倍,无关节损害组是正常对照组0.33倍;无关节损害组FOXP3 mRNA表达水平是关节损害组的2.11倍;而T-bet mRNA在三组间的表达无明显差异。5.未治疗组GATA3 mRNA表达水平是正常对照组的0.33倍,治疗组该基因表达水平明显上升,但仍低于正常对照组;未治疗组FOXP3 mRNA表达水平是正常对照组的0.54倍,治疗组该基因表达水平显著升高,与正常对照组无明显差异;而T-bet在三组中无明显差异。6.dsDNA（+）组患者GATA3 mRNA表达水平是正常对照组的0.51倍,dsDNA（-）组患者GATA3 mRNA表达水平是正常对照组的0.45倍,而T-bet和FOXP3 mRNA的表达水平在这三组中无明显差异。7.SLE患者组T-bet/GATA3的比值高于正常对照组。SLE患者T-bet/GATA3无肾损害组高于肾损害组,无关节损害组高于关节损害组,dsDNA（-）组高于dsDNA（+）组。结论1.SLE患者GATA3 mRNA表达水平低于正常对照组,SLE患者T-bet/GATA3的比值活动期高于稳定期和正常对照组,说明T-bet和GATA3可能参与了SLE的发病,并且T-bet/GATA3的模式在SLE疾病活动中起作用。2.SLE患者活动组FOXP3的表达与SLEDAI呈负相关,提示SLE患者Foxp3mRNA的表达与疾病活动有明显的相关性,且对SLE患者的病情活动程度的判断有一定的价值。3.SLE患者未经治疗T-bet/GATA3的比值显著高于正常对照组,经过糖皮质激素治疗后比值明显降低,与正常对照组相近。说明PBMCs中T-bet/GATA3可以作为糖皮质激素治疗疗效的有效指标之一。4.未治疗组FOXP3 mRNA的表达水平显著低于正常对照组,治疗后该基因表达水平显著升高,与正常对照组无明显差异;说明体外转导FOXP3基因诱导非天然Treg细胞向Treg细胞的转化可能作为治疗SLE的新策略。