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猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）是近年来发现的一种新病毒，引起猪的繁殖和呼吸系统综合征。该病以母猪发热、厌食和流产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。PRRSV是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病，本病自九十年代中期在我国发现以来，现已在全国呈蔓延趋势，所以对PRRSV的检测及预防尤为重要，建立一种快速高效的诊断方法对于PPRSV的控制具有重大的意义。 用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ对重组质粒pMD18-T-MN进行双酶切，回收获取MN基因片段后将其亚克隆至pBV220原核表达载体上；重组表达质粒用Pvu Ⅱ进行单酶切鉴定，EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切鉴定；经酶切初步鉴定后，送宝生物工程（大连）有限公司测序，将其序列与pMD18-T-MN上MN基因序列进行比对，未发生碱基突变。由此可知，本试验成功构建了重组表达质粒pBV MN。将重组表达质粒pBV MN转化宿主菌DH5α，重组表达质粒菌经30℃活化过夜后，1∶50稀释到LB培养基增殖培养，待浓度达到OD600=0.2～0.4时，迅速升温至42℃诱导4～6h，收集细菌，裂解后经SDS-PAGE可检测到一条分子量约为19kd的目的蛋白条带，经蛋白质分析软件Bandscan分析，其表达量可达19.1％；Western-Blotting分析结果表明该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别，与预期的M基因表达产物相一致，而N基因的表达产物未检测到。将重组表达质粒菌进行温度敏感诱导表达，之后对表达的重组M蛋白进行纯化用作包被抗原，建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法，并确立了ELISA最佳工作条件：抗原包被浓度为3.5μg／ml，37℃ 1h，4℃过夜，血清（1∶40）和酶标SPA（1∶80）分别在37℃温育1h，加底物溶液常温显色5分钟后观察结果。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验，结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高；将建立的M-ELISA方法与美国IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒相比较，其特异性和敏感性分别为96.3％和93.5％，符合率达到89％，统计学分析，这两种检测方法的检测结果无显著性差异。用M-ELISA操作程序对来自四川地区不同猪场的168份样品进行检测，结果表明，四川各地不同猪场的血清样品均有不同程度的PRRS抗体，各猪场的PRRS污染率在5.9％～67.6％之间，平均阳性率为39.9％。