犬瘟热病毒严重危害宠物犬和毛皮经济动物的健康,每年都有大量犬瘟热病毒宿主动物死亡案例发生。尽管存在治愈方法,但交叉感染、二次感染和后期免疫抑制的问题仍使得主动免疫是预防和控制犬瘟热最有效的方式。同时考虑到犬瘟热病毒血凝素蛋白在病毒感染阶段起到首要的受体识别结合作用并参与到病毒融合过程,这一特点也使得血凝素蛋白成为研发可诱导产生犬瘟热病毒中和抗体的关键靶标。综合考虑血凝素蛋白在病毒感染周期的重要作用,诱导机体产生可针对血凝素蛋白的广谱中和抗体或许可以成为预防犬瘟热病毒的新型疫苗。通过保守性分析和多种免疫细胞表位预测方法获得多条潜在表位序列。这些序列均大量暴露在蛋白表面,因此分析并评价这些表位的免疫效果和保护力是本论文的研究重点。大量实验表明,Ferritin蛋白有着极强的自组装能力,且自身免疫原性极低,是优秀的抗原呈递载体。因为表位序列均为长度在27-48aa长度的氨基酸片段,存在免疫原性较低的劣势,利用Ferritin的组装能力高效的展示目标抗原表位从而提高免疫原性。我们将三条表位偶联至Ferritin上,并通过原核上清表达获得天然状态的重组二十四聚体蛋白YaH3F、YaH4F和YaH5F,并对重组蛋白的大小和结构进行表征,同时为了对比表位序列的免疫效果,构建了真核重组质粒Δp YaHF,将两种免疫原进行小鼠体内免疫并对免疫效果进行评价。BALB/c雌性小鼠经过三次免疫,均产生了针对抗原表位的特异性抗体,且特异性抗体水平可以长期保持在高滴度水平,展现出长效性。抗体分型与细胞因子检测结果趋于一致,YaH4F、YaH5F和YaHF均同时诱导了以体液免疫反应为主的免疫应答,同时伴有细胞免疫应答。重组蛋白免疫血清对犬瘟热毒株CDV-11有着不同程度的中和活性,其中重组蛋白YaH3F组血清的ID50可达到503,YaH4F为933,YaH5F达到218,重组质粒YaHF为840。在淋巴细胞增殖检测实验中,所有的免疫原均诱导了更高水平的淋巴细胞增殖能力,但对于同源同种的刺激物的应答状态要显著优于异种刺激物。对淋巴细胞表面抗原含量检测,所有的免疫原均有效诱导脾脏内CD3+T淋巴细胞数量的增加,YaH4F、YaH5F和YaHF趋向于CD4方向的分化而YaH3F则趋向于CD8,这与抗体分型和细胞因子检测结果一致。同时检测血清对于抗原的识别和杀伤能力,YaH4F组小鼠血清可产生40.6%的杀伤效率,YaHF、YaH5F和YaH3F的ADCC反应也优于阴性对照组。反应了血清抗体对于抗原的识别也验证了机体发挥细胞免疫功能对于病变细胞的清除效率。综上,YaH4F是根据血凝素蛋白感染作用机制结合保守性分析和抗原功能区分析得到的重组Ferritin的蛋白颗粒,免疫实验证明通过原核表达获得的YaH4F自组装纳米粒子的免疫效果与YaHF相比较好,诱导了高水平且长效的特异性中和抗体水平,并同时诱导产生Th1型和Th2型免疫途径且ADCC效应也较为突。但表位疫苗无法刺激机体免疫细胞产生针对完整抗原的高增殖能力,这是需要解决和权衡的。通过原核表达免疫原不仅周期较短、研发成本较低且不存在使用风险。H4有可能成为简便、快速制备表位的关键靶点以此应对不断变异的犬瘟热病毒。