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在我们以往的研究中发现80例不同组织学类型的肺癌标本中EBV感染率40％，120例肺鳞癌标本中HPV检出率达35％。PTEN是新近发现的第一个具磷酸酯酶活性的抑癌基因，在多种肿瘤中均有突变．为了研究EBV、HPV和PTEN在肺癌发生中的作用，我们①将EBV和HPV基因片段以及正义和反义PTEN转染人支气管上皮永生化细胞系TR，观察它们对TR细胞的转化作用；②检测人肺癌中PTEN的杂合性丢失（LOH）和失活：③将PTEN转入PTEN-/-（PTEN纯和性丢失）的小细胞肺癌细胞系，观察转染后癌细胞的生长情况。 1．LMP1和EBNA2是EBV最主要的转化相关基因，将LMP1和EBNA2的真核表达质粒pBS-LMP1-Hyg，pSG5-EBNA2-Hyg用Dosper介导共转染TR细胞，得到抗药性细胞株TR／LMP1-EBNA2。经原位杂交和Western blot证实TR／LMP1-EBNA2中有LMP1和EBNA2在RNA和蛋白水平的共同表达。转化细胞体积变小，折光性增强，生长曲线和MTT值显示生长加快，软琼脂集落形成率增高（TR／LMP1-EBNA2为5.01％，6.82％：TR／Hyg为0.2％，0.3％；TR细胞为0.1％，0.07％）。虽然EB病毒基因可以使永生化支气管上皮细胞向恶性表型转化，但尚不具裸鼠致瘤性。 2．将HPV-16的转化相关片断E6E7构建入逆转录病毒载体pBahe-puro得到质粒pBabe／E6E7，转染TR细胞。Southern，Northern和Western blot证实TR／E6E7中有E6E7的存在和稳定表达。TR／E6E7细胞除在3H-TdR掺入、MTT、生长曲线这些指标上表现出生长加快的特性外，还具较TR／LMP1-EBNA2细胞更高的软琼脂集落形成率（TR／E6E7细胞为9.21％，9.48％），并在裸鼠体内形成肿瘤。因此，HPV在肺癌发生中可能具有较强作用。免疫沉淀-Western blot实验还显示TR／E6E7细胞中与cyclin E／CDK2结合的p27蛋白数量减少，即cyclin E／CDK2活性增强，细胞将从G1