福建省(木奈)、李、桃种质资源的ISSR分子分析

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ISSR(Inter simple sequence repeats )是一种新型的分子标记[1]技术,它能够反应植物在遗传物质DNA水平下的差异,不受任何环境条件影响,在遗传上多为共显性。ISSR分子标记方法简便,重复性好,结果可靠。ISSR遗传标记在部分作物及果树的亲本鉴定和杂交种子纯度检测上已得到了行之有效的应用。但将该项高新技术应用到福建省(木奈)、李、桃的品种鉴定上,至今在国内外未见报道。福建特色水果(木奈)的起源及其和桃、李的亲缘关系也存在争议。因此,本文拟通过ISSR分析进一步探讨它们之间的亲缘关系。(木奈)(Prunus salicina Lindl. Var. cordata J.Y.Zhang et al.)是福建特产佳果,已有400多年的栽培历史,(木奈)的主要品种有‘花(木奈)’、‘青(木奈)’、‘油(木奈)’。(木奈)、李、桃都属于蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)植物,但对(木奈)的起源问题存在不同的意见。本研究以福建省主栽的(木奈)、李、桃等69份品种资源为对象,运用ISSR分子标记技术对其进行研究,分析探讨它们之间的亲缘关系与遗传多样性。主要结果如下:1.本研究针对(木奈)、李富含酚类化合物和多糖等物质导致DNA提取和纯化困难的特点,进行综合设计,探索出一套操作简便、快速、准确、高质量的(木奈)、李、桃DNA提取和纯化技术。2.在前人研究的基础上,本研究分别从引物退火温度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物浓度和Taq酶量等方面去优化扩增体系,探索出一套适合于分析(木奈)、李、桃种质资源的ISSR反应体系。3.本试验从96个ISSR引物中,筛选出16个多态性丰富、重复性好的引物。用筛选的16个引物对69份蔷薇科李属果树品种资源进行ISSR分析,共扩增出119条谱带,其中多态性谱带为108条,多态性比率为90.8%。4.根据试验结果在DS=0.562处做第一等级划分,可将69个样本分为4类。第一类包括所有的(木奈)和李;第二类只有青梅;第三类只有红叶李;第四类包括所有的桃。第一等级划分出了(木奈)、李与桃品种间的差异,由此我们可以断定(木奈)与李的亲缘关系要比桃近。在DS=0.742处做第二等级划分,可将第一大类再划分为9组。5.试验结果表明,供试的69份蔷薇科李属果树品种资源两两之间的GS值在0.330~0.952之间。油(木奈)和青(木奈)间相似度最高,遗传相似系数最高为0.952,青(木奈)与安格诺李最高相似系数为0.923,供试的(木奈)与李平均相似系数为0.771。而(木奈)与桃之间遗传相似系数最低,为0.330。从总体情况看,供试的69份品种资源两两间的相似系数不高,平均为0.588。这说明桃与(木奈)、李的亲缘关系较远;(木奈)与李的遗传距离非常近,而与桃的遗传距离比较远,从而推测(木奈)并非桃与李的杂种,是李的一个种或变种。
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