野油菜黄单胞菌产胶基因GumD重组质粒的克隆与构建

来源 :上海水产大学 上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maitianquan159
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当前,各种新类型的微生物多糖不断出现,但黄原胶却是世界范围内唯一在多种行业中得到广泛应用的具有重大商业价值的微生物多糖。它是以玉米淀粉为主要原料而产生的一种高分子量的杂聚糖。因其独特的分子结构,因而具有独特的流变性、良好的水溶性、对热酸碱的稳定性等许多优异的物理化学性能,已被广泛应用于食品、饮料、化妆品、洗涤剂、陶瓷、石油开采、化工涂料、森林灭火等三十多种行业。 采用基因技术改造植物、微生物,在当前的时代已不是高不可测的尖端技术。随着基因技术的发展,针对黄原胶产率的研究也由菌种选育、培养基、发酵条件等转向基础代谢流、基因工程和酶工程方面的研究。本文对黄原胶的分子结构和理化性质、发展现状及其在各行业中的应用等作了一些简要的介绍并根据前期的实验,介绍了在黄原胶的探索方面的所取得的最新成果。 本文主要建立了野油菜黄单胞菌产胶基因GumD重组质粒的克隆与构建方法。通过基因工程手段,以前期黄原胶菌株基因组DNA为模板,优化PCR实验条件扩增得到产胶GumD基因片断,与抗药性质粒pMD18-T连接。CaCl2法转化JM109大肠杆菌细胞,进行产胶GumD基因重组质粒的克隆与构建。最后将产胶基因GumD导入到新的完整的菌株中,进行的表达试验会使其具有双产胶基因或更多的产胶基因并稳定遗传,最终第1页其56页以期能使黄原胶的产量成倍成数倍地增长。那将会为黄原胶的生产带来根本的革命。因而本课题所涉及的有关野油菜黄单胞菌GumD基因的克隆与构建的研究,具有极其重要的现实意义。
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