【摘 要】
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目的1、观察正常培养的ARPE-19细胞ERRα表达水平及蓝光对其表达的影响2、探究ERRα在蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用及机制方法1、建立蓝光模型:以ARPE-19细胞作为研究对象进行分组:对照组(避光)和不同光照时长蓝光组(2、4、6、8h),倒置显微镜观察各组细胞形态改变,CCK-8法检测各组ARPE-19细胞增殖率。Western blot检测蓝光光照时长对ARPE-19细胞c
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目的1、观察正常培养的ARPE-19细胞ERRα表达水平及蓝光对其表达的影响2、探究ERRα在蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用及机制方法1、建立蓝光模型:以ARPE-19细胞作为研究对象进行分组:对照组(避光)和不同光照时长蓝光组(2、4、6、8h),倒置显微镜观察各组细胞形态改变,CCK-8法检测各组ARPE-19细胞增殖率。Western blot检测蓝光光照时长对ARPE-19细胞cleaved-caspase3和ERRα蛋白的表达的影响。2、实验分为对照组(避光)、XCT-790组、蓝光组、蓝光+XCT-790组;Tunel法检测各组ARPE-19细胞凋亡率;Western blot检测各组ERRα蛋白的表达;qPCR法分别检测各组Bcl-2、Bax mRNA水平;结果1、蓝光对ARPE-19细胞形态的影响:蓝光可导致细胞形态异常:呈圆形、体积缩小,细胞核缩小,细胞边缘可见透亮圈,培养基中可见悬浮细胞和细胞碎片;2、蓝光对ARPE-19细胞增殖率的影响:与对照组相比,各蓝光组的细胞增殖率均降低(P<0.01),随着光照时长增加,细胞增殖率进一步下降(P<0.01)。3、蓝光对cleaved-caspase3、ERRα蛋白表达的影响:与对照组比较,cleaved-caspase3蛋白相对表达量从2小时起出现较明显增高(P<0.01),并随着光照时长的增加而增高(P<0.01)。与对照组相比,各光照组ERRα表达量均升高(P<0.01),随着光照时长的增加,表达量继续上升,光照6h表达量最高。4、ERRα蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用:与对照组比较,XCT-790差异不具有统计学意义(P>0.05),蓝光组凋亡率增加(P<0.01);与蓝光组比较,蓝光+XCT-790组细胞凋亡率增加(P<0.01)。5、ERRα抑制蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的机制初探:与对照组比较,XCT-790组的ERRα蛋白表达量降低(P<0.01);与蓝光组比较,蓝光+XCT-790组的ERRα表达明显降低(P<0.01)。正常培养条件下,XCT-790对Bcl-2、Bax mRNA表达无影响(P>0.05),蓝光诱导下,XCT-790对Bax mRNA表达无影响(P>0.05),而导致Bcl-2 mRNA表达量进一步减少(P<0.01)。结论1、正常培养的ARPE-19细胞ERRα蛋白低水平表达2、蓝光诱导ARPE-19细胞凋亡增加,同时引起ERRα蛋白表达增加3、ERRα可减轻蓝光诱导的ARPE-19细胞凋亡4、蓝光诱导条件,ERRα可能通过促进ARPE-19细胞Bcl-2表达,起到抗细胞凋亡作用
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