分枝杆菌细胞全容物在细菌抵御巨噬细胞降解作用的研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinxin1234580
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结核杆菌是一种慢生长胞内细菌,能够在细胞内存活并缓慢增殖,在免疫系统功能下降时,细菌爆发性增值并引起严重肺部炎症,威胁生命。结核杆菌作为一种胞内细菌,具有逃避免疫细胞攻击的特点,研究其对免疫系统攻击机制对研发特效抗结核药物以及新的检测手段的发现具有十分重要的意义。位于细胞壁外侧的脂多糖可以引发多种免疫反应,尤其是LAM/LM(脂阿拉伯甘露糖聚糖/脂甘露糖聚糖)被认为介导了Thl/Th2型细胞免疫反应,决定了细菌在细胞内的存活。然而,结核杆菌与细胞互作是一个复杂的免疫反应,寻找具有免疫逃避功能的分子,需要从不同水平进行检测,包括从细菌水平到分子水平如LAM等,才能确认靶分子并对细菌与细胞互作进行真实的表述。由于结核杆菌具有高的致病性,耻够杆菌常作为替代菌对结核相关特性进行研究。本论文使用耻垢分枝杆菌及其细胞全容物利用气雾攻击法,对小鼠肺部进行侵染,同时利用巨噬细胞做了相应的体外实验,对细菌在细胞以及肺部互作规律进行描述,为细菌在细胞内存活相关活性因子提供了实验依据,并为进一步分选有效组分提供研究手段。本课题使用了耻垢分枝杆菌和大肠杆菌两种细菌对小鼠肺脏进行了侵染,发现这两种细菌在存活和被清除的特点上存在差异。在较低侵染浓度时(MOI≤10以及≤108CFU/mouse)两种细菌都表现为迅速被清除,当侵染浓度较高时(MOI≥100以及≥109CFU/mouse)表现为肺脏清除细菌速率减慢,甚至不能控制细菌的增值,于是选择适当的细菌侵染浓度(MOI=10以及107CFU/mouse)进行实验,发现细菌在24-72h内表现为被清除,但耻垢分枝杆菌清除速率较大肠杆菌的要慢,于是利用两种细菌的细胞全溶解物(WCL)对这两种模型进行干预,发现细菌细胞全容物影响细菌存活和清除的规律,且耻垢分枝杆菌WCL(S)降低了大肠杆菌被清除的速率。进一步利用分离的细胞壁组分对这两中模型进行干预,发现细菌细胞全容物影响巨噬细胞功能,对细菌存活率有较大影响,WCL(S)具有帮助大肠杆菌提高在细胞内存活的能。同时检测了细胞形态以及肺部损伤与细菌清除规律之间的关系。分别从动物和细胞水平,验证了细菌存活能力的差异,以及WCL在其中所起的作用。实验结果显示,利用高浓度耻垢分枝杆菌侵染小鼠肺部后,肺部出现炎症,短期出现了结核相类似的病理特征,提示该模型可用于模拟结核杆菌对肺部的早期感染。耻够杆菌在巨噬细胞中表现出较大肠杆菌更长的存活时间,且清除速率较慢,且WCL(S)具有帮助大肠杆菌提高在细胞内存活的能力。
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