Lrrc10基因是采用EST介导的基因克隆和表达谱分析，成功克隆的一个在小鼠心脏特异表达的新基因，该基因cDNA全长为1410bp，定位于小鼠染色体10D2，无内含子，其最大开放阅读框编码的假定蛋白有274氨基酸组成，含有7个亮氨酸重复继续基序。Lrrc10基因是第一个被报道具有心脏特异性的LRR家族成员，目前的研究表明所有LRR蛋白的功能均与蛋白质相互作用有关，至少一半的LRR蛋白参与信号转导通路，而人类的胚胎发育和很多疾病都与信号转导通路密切关联。该基因有可能成为药物设计中特异性的、副作用小的靶标，具有重要的理论和实际意义。因此，本文通过构建Lrrc10原核表达载体以期获得重组Lrrc10蛋白，为进一步的功能研究提供基础，同时在研究胚胎癌细胞P19的体外心肌分化过程中Lrrc10基因表达，为探讨Lrrc10与心肌发育的关系提供依据。 1.重组质粒pET-Lrrc10的构建和Lrrc10蛋白表达 方法：NcoI和BamHI双酶切载体pMD18-T-Lrrc10，回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a(+)连接，转入E.colistrainDH5a，菌落PCR筛选阳性菌落，提取阳性菌质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E.colistrainBL21(DE3)，于37℃振荡培养，利用1mmol/LIPTG诱导目的蛋白的表达。 结果：PCR鉴定和酶切鉴定的结果表明，成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrc10。转入E.colistrainBL21(DE3)进行目的蛋白的表达，获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrc10;Lrrc10蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中，且IPTG诱导4小时时，目的蛋白表达量最大。 2.Lrrc10在分化心肌细胞中的表达研究 方法：DMSO诱导P19细胞分化，建立P19体外心肌发生模型，显微镜观察细胞形态变化，以心肌特异性肌节肌球蛋白重链a-MHC和B-MHC作为心肌分化的标志；提取未分化的P19细胞及分化2天、4天、6天、8天的P19细胞的总RNA，反转录合成第一链cDNA。以cDNA为模板进行PCR，检测Lrrc10的基因表达。 结果：显微镜观察，部分细胞形态发生明显变化；RT-PCR结果显示，在细胞分化6天时检测到a-MHC基因表达，分化到8天时检测到B-MHC开始基因表达，表明P19细胞体外心肌分化成功；P19细胞分化的第二天Lrrc10基因开始表达。 结论：成功构建了融合表达载体pET-Lrrc10，并获得与预期相一致的目的蛋白；Lrrc10在P19体外心肌分化过程中表达，推测-Lrrc10可能心肌分化有关。