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目的经过前期筛选,采用YN和TV1混合,制备外用透皮吸收制剂YNT涂膜剂,初步探讨YNT涂膜剂经皮给药的抗血栓、抗炎作用,考察YNT涂膜剂联合用药的疗效;对YN涂膜剂和TV1涂膜剂的透皮吸收特性开展研究,为后续YNT涂膜剂的透皮吸收实验及经皮给药制剂研究提供理论依据和方法参考。方法YNT涂膜剂对大鼠实验性脑血栓形成的影响研究,采用大鼠实验性脑血栓模型,分为假手术组、模型组、YN涂膜剂组(10 mg/kg)、TV1涂膜剂组(3.33mg/kg)、YNT高(TV1:YN 6.67:10 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 3.33:10 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 1.67:10 mg/kg)剂量组,以神经行为学评分、血液流变学、凝血和纤溶系统功能以及脑组织中炎症细胞因子IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α的含量作为检测指标,考察YNT涂膜剂对大鼠脑血栓形成的影响。YNT涂膜剂对小鼠体内血栓形成的影响研究,采用尾静脉注射胶原蛋白-肾上腺素复合诱导剂诱导小鼠偏瘫模型,分为正常组、模型组、YN涂膜剂组(20mg/kg)、TV1涂膜剂组(18.88 mg/kg)、YNT高(TV1:YN 37.75:20 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 18.88:20 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 9.44:20 mg/kg)剂量组,以小鼠体内血栓形成情况、偏瘫小鼠肺组织病理变化作为检测指标,考察YNT涂膜剂对小鼠体内血栓形成的影响。YNT涂膜剂对小鼠体内抗炎作用的影响研究,采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致小鼠足肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性亢进模型,分为正常组、模型组、阿司匹林组(200mg/kg)、YN涂膜剂组(20 mg/kg)、TV1涂膜剂组(18.88mg/kg)、YNT高(TV1:YN 37.75:20 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 18.88:20 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 9.44:20 mg/kg)剂量组,以小鼠耳足肿胀度、腹腔毛细血管通透性组间差异显著性,作为检测指标,考察YNT涂膜剂对小鼠抗炎作用的影响。YNT涂膜剂透皮吸收特性初探,采用改良的TPY-2型药物透皮扩散试验仪,借助HPLC法进行含量测定,考察YN涂膜剂的体外透皮吸收特性;利用ADP诱导大鼠体内血小板聚集形成血栓模型,通过比浊法测定血小板聚集率,考察YN涂膜剂对大鼠体内血小板聚集的影响,并用HPLC法检测YN体内代谢的血药浓度;采用改良的TPY-2型药物透皮扩散试验仪,建立TV1涂膜剂体外透皮吸收实验方法。YN涂膜剂和TV1涂膜剂的透皮吸收实验研究,为后续YNT涂膜剂的透皮吸收实验提供方法参考和实验基础。结果1 YNT涂膜剂的抗血栓、抗炎作用探究1.1 YNT涂膜剂对大鼠脑血栓形成的影响实验结果表明:假手术组,神经行为学无异常;模型组,出现明显的神经功能缺失;与模型组比较,YNT(TV1:YN)涂膜剂高、中、低(6.67:10 mg/kg.BW、3.33:10 mg/kg.BW、1.67:10 mg/kg.BW)剂量组,神经功能有恢复趋势,造模后24 h神经功能评分TV1组、高剂量组显著降低(P<0.05);高、中、低剂量组有降低切变率在10/s、60/s、150/s、200/s下的全血粘度、卡松粘度、FIB含量、延长PT的趋势;高剂量组能显著降低全血粘度1/s、红细胞聚集指数(P<0.05),提示YNT涂膜剂可能是通过改善神经功能缺失、血液黏度、血液流动状态,来抑制脑血栓形成和发展。与模型组比较,YN涂膜剂高剂量组IL-6含量明显升高(P<0.05),高、低剂量组IL-10含量有升高趋势;YNT低剂量组TNF-α含量显著降低(P<0.05),高、中剂量组TNF-α含量有降低趋势(P>0.05),提示YNT涂膜剂的脑保护机制可能是通过影响脑内炎症细胞因子的表达。与TV1涂膜剂组比较,YNT涂膜剂抑制大鼠实验性脑血栓的形成和发展作用没有显著性差异,YN的加入对YNT涂膜剂的疗效没有增强的作用。1.2 YNT涂膜剂对小鼠体内血栓形成的影响实验结果表明:YNT(TV1::YN)涂膜剂高(37.75:20 mg/kg.BW)剂量组能显著抑制小鼠偏瘫形成(P<0.05),病理学组织结果显示高剂量组小鼠肺组织有轻度淤血,无明显出血,提示YNT涂膜剂可能对抑制小鼠体内血栓形成和发展有一定作用;与TV1涂膜剂组比较,YNT涂膜剂抑制小鼠体内血栓形成没有显著性差异,YN的加入对YNT涂膜剂的疗效没有增强的作用。1.3 YNT涂膜剂对小鼠抗炎作用的影响实验结果表明:YNT(TV1:YN)涂膜剂高、中、低(37.75:20 mg/kg.BW、18.88:20 mg/kg.BW、9.44:20 mg/kg.BW)剂量组有抑制腹腔毛细管通透性亢进趋势,低剂量组有抑制耳肿胀度趋势,提示YNT涂膜剂对急性炎症可能有效,其抗炎机制和有效剂量待进一步研究;与TV1涂膜剂组比较,YNT涂膜剂对小鼠抗炎作用没有显著性差异,YN的加入对YNT涂膜剂的疗效没有增强的作用。2 YNT涂膜剂透皮吸收特性初探2.1 YN涂膜剂透皮吸收实验方法摸索实验结果表明:建立的YN含量测定方法,方法学验证结果良好,该检测分析方法科学可靠,适用于YN涂膜剂的体外透皮吸收实验。2.2 YN涂膜剂的抗血小板聚集及体内血药浓度检测方法摸索实验结果表明:YN涂膜剂对ADP诱导下大鼠的体内血小板聚集有一定抑制作用,30 min处有最大抑制率和最高血药浓度。2.3 TV1涂膜剂体外透皮吸收实验方法摸索经实验初步发现,TV1涂膜剂在体外透皮吸收实验中,2 h开始TV1的B峰能明显透过皮肤进入到接收液中,透皮吸收72 h后在接收液中TV1的B峰仍能检测得出,其余峰暂时还未能在接收液中检测出。结论综上所述,YNT涂膜剂可能是通过改善神经功能缺失,改善大鼠血液黏度,从而对抑制大鼠实验性脑血栓形成产生一定作用,且在一定程度上对抑制小鼠体内血栓的形成和发展可能有效,同时有一定抗急性炎症作用,在抗血栓和抗炎药效方面,YN的加入对YNT涂膜剂的疗效没有增强的作用;为YNT联合用药的后续研究提供了实验基础和新的思路;所建立的YN含量测定方法及TV1透皮吸收方法的摸索,为后续YNT涂膜剂经皮给药体内外实验研究和经皮制剂研发提供了方法参考。