论文部分内容阅读
缺血后处理是新近提出的一种减轻器官缺血再灌注损伤的新方法,指在缺血器官全面恢复再灌注之前给予反复多次的短暂再灌注-缺血处理。目前的研究业已证实,缺血后处理对心脏、肝脏、脑等器官具有保护作用。我科研究生已经成功的建立了肾脏缺血后处理的大鼠模型,且证明缺血后处理对肾脏同样具有保护作用。我们对此模型又进行了改进,在此基础上探讨缺血后处理对大鼠肾脏功能以及p38MAPK和JNK蛋白的影响。目的探讨缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)对缺血再灌注大鼠肾功能、肾脏p38MAPK和JNK蛋白的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术(S)组、缺血-再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组,每组又分为8个时间段(0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h)。S组分离出左肾动脉,结扎右肾蒂,暴露45min后关腹;IR组结扎右肾蒂,用血管夹阻断左肾动脉45min后恢复血供;IPO组结扎右肾蒂,用血管夹阻断左肾动脉45min后给予反复10次的恢复血供20s-阻断血供20s处理,然后再恢复血供。肾脏完全恢复血供后不同时段(0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h)留取血和肾组织标本,应用生化分析仪检测肾功能和化学法检测尿NAG酶,采用免疫组织化学和Western印迹方法检测上述三组肾组织中的p38MAPK、JNK蛋白的表达。结果1.与S组相比,IR组的血BUN和Scr均显著增高(P <0.05),从1h开始轻微升高, 24h达最高峰[BUN(30.97±9.96)mmol/L ,SCr (238.3±54.2)μmol/L (P <0.05)], 48h开始回落到基线水平,72h无明显变化;IPO组血BUN和Scr略有降低,但各时间段与S组相比均无统计学意义(P >0.05)。与IR组相比,IPO组的血BUN和Scr总体水平低于IR组(P <0.05),其高峰出现在12h [BUN(15.8±0.9)mmol/L ,SCr (44.7±3.5)μmol/L (P <0.05)],但24h下降变化最明显[BUN(8.0±0.6)mmol/L ,SCr(44.0±4.6)μmol/L (P <0.05)]。2.与S组相比,IR组和IPO组尿NAG酶均高于S组(P<0.05)。IR组尿NAG酶在术后6h达高峰[(98.47±2.69)U/L(P<0.05)],此后逐渐下降,48h回到基线水平;IPO组尿NAG酶高峰出现于3h[ (99.78±7.91)U/L(P<0.05)]。与IR组无相,IPO组6h下降最显著[(40.51±1.44)U/L(P<0.05)],一直持续到12h,48h回到基线水平。3.光镜下观察, p38MAPK和JNK在近端和远端肾小管上皮细胞都有表达,以近端肾小管上皮细胞表达为主。以S组为对照,IR组p38MAPK和JNK都在术后0.5h开始升高,1h达高峰[p38MAPK(96.6±3.7)%,JNK(89.8±6.1)% (P<0.05) ],3h开始有所回落,6h基本回到基线。随着再灌注的时间延长,12h又开始大量表达,24h又达高峰[p38MAPK(93.2±4.1)%,JNK(95.6±4.4)% (P<0.05) ],此后开始回落,48h回到基线水平,72h后也无明显变化。IPO组的p38MAPK/JNK蛋白表达较IR组明显减弱,以1h和24h减弱最显著,分别为[p38MAPK(49.8±22.5)%,JNK(28.4±5.3)% (P<0.05) ]和[p38MAPK(44.4±19.5)%,JNK(50.4±10.2)% (P<0.05) ]。Western blot方法证实,与S组相比,IR组和IPO组的p38MAPK和JNK蛋白表达强度增高。IR组p38MAPK和JNK蛋白在0.5h就有表达,1h[p38MAPK(1.03±0.08),JNK(0.68±0.03) (P<0.05) ]和24h[p38MAPK(0.68±0.06),JNK(0.77±0.06) (P<0.05) ]表达强度最明显。IPO组p38MAPK和JNK蛋白表达强度明显较IR组降低,以1h和24h降低最显著,分别为[p38MAPK(0.78±0.07),JNK(0.50±0.03) (P<0.05) ]和[p38MAPK(0.44±0.09),JNK(0.52±0.06) (P<0.05) ]。结论缺血后处理对缺血再灌注大鼠肾脏具有保护作用,通过减弱p38MAPK和JNK蛋白表达可能是其发挥保护作用途径之一。