目的:利用人工方法构建长期表达HBx(Hepatitis B virus x)的KM小鼠动物模型,观测HBx是否能影响小鼠肝脏炎症相关因子和细胞增殖以及探究内在的分子机制。方法:将HBx基因转入慢病毒并感染肝前体细胞株14-19(Hepatic progenitor cells,HPCs)构建HBx-EGFP-14-19细胞株,荧光显微镜观察HBx-EGFP-14-19细胞株绿色荧光蛋白表达率,采取q RT-PCR和Western blot方法检测HBx在HBx-EGFP-14-19细胞株是否表达;针管吸取HBx-EGFP-14-19注射进KM小鼠的肝门静脉中,构建表达HBx基因的动物模型。模型构建后30天,90天,180天,360天后提取模型肝脏组织,利用q RT-PCR,Western blot和免疫组化方法检测各组HBx基因在小鼠体内表达情况。利用Western blot,q RT-PCR检测各时间点组别肝脏组织细胞周期分子Cyclin D1和CDK4的动态表达情况,炎性因子TNFα和抗炎因子IL-10的动态表达情况,以及ERK1/2信号通路因子成员的动态表达水平并与对照组进行比较。利用HE染色并镜下观察HBx是否引起肝脏病理水平变化。另取180天的小鼠通过腹腔注射的方法给予ERK1/2信号通路抑制剂U0126,连续使用抑制剂处理小鼠11天后取肝脏,检测U0126对小鼠肝脏中细胞周期因子Cyclin D1、CDK4、炎性因子TNFα和抗炎因子IL-10表达水平的影响。结果:稳定表达HBx基因的小鼠模型构建完成。与对照组相比,HBx-EGFP-14-19组小鼠肝组织中CDK4、Cyclin D1和TNFα基因表达活性在HBx-EGFP-14-19 30天组时即显著提高,IL-10的表达水平显著下降;HBx在体内稳定表达30天后明显上调ERK1/2信号转导通路中ERK1/2和MEK1/2蛋白的磷酸化水平,显示ERK1/2信号转导通路被HBx持续性显著激活。给予ERK1/2信号通路抑制剂U0126后,与对照组相比,实验组CDK4、Cyclin D1和TNFα的m RNA表达水平显著下调;同时,CDK4、Cyclin D1和TNFα蛋白水平显著下调,IL-10的m RNA和蛋白表达水平显著增加。HE染色结果显示HBx-EGFP-14-19 30天组小鼠肝脏无明显病理改变;HBx-EGFP-14-1990天组肝脏组织明显可见静脉周围以及小叶内可见炎性细胞团浸润;HBx-EGFP-14-19 180天组小鼠肝脏可见存在广泛肝细胞脂肪变性;HBx-EGFP-14-19 360天组胞质中含有圆形的大小不一的空泡,局部可见一处炎性细胞浸润小灶。饲养360天小鼠肝脏组织汇管区较多淋巴细胞浸润,较多肝细胞水肿,胞质疏松淡染,部分严重水肿至气球样变。结论:HBx在体内通过异常持续性激活ERK1/2信号通路引起肝脏炎性因子改变,加快细胞增殖进程。