登革病毒(dengue virus, DV或DENV)可以感染人类并导致严重的临床疾病,引起的登革出血热和登革休克综合征病死率高。因些对登革病毒感染患者的早期诊断有很重要的意义。登革病毒非结构蛋白NS1具有较强的免疫原性,早期即可出现在感染了登革病毒的患者血清中,且出现时间早于IgM抗体,有研究表明其可以用于登革热的早期诊断以及病情监测。因此,NS1有望成为早期诊断登革病毒感染的方法。本课题研究利用生物信息软件分析四种血清型登革病毒NS1的抗原表位,选择四种血清型NS1蛋白中共同保守的抗原表位通过与小分子载体BSA偶联,通过免疫小鼠以及杂交瘤技术制备获得四个型别NS1通用型单克隆抗体23株。同时根据Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白基因序列设计特异性NS1引物,经RT-PCR得到四种型别的NS1全基因,并分别克隆到pMD19T载体上,随后,经BamH Ⅰ和Not Ⅰ双酶切将目的片段进一步克隆到表达载体pET30a上,构建Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白BL-21高效表达菌株。表达菌株经培养和IPTG诱导,目的蛋白获得高效表达,四型表达产物经Western Blot鉴定后,进一步经过透析复性和蛋白纯化,制备获得重组I-IV型登革病毒NS1蛋白,浓度达2.7mg/ml。随后,利用制备获得的I-IV型登革病毒NS1通用单克隆抗体和重组的NS1蛋白建立ELISA检测体系,通过双抗夹心法成功建立了基于登革病毒NS1抗原的ELISA检测方法。