SELDI-TOF-MS法分析体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87细胞培养液蛋白质谱的变化及化疗药物对其影响

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目的分析体外培养的人表浅性膀胱癌细胞株BIU-87的细胞培养液中蛋白质谱的变化及表阿霉素,丝裂霉素C作用于细胞后对其的影响。方法体外传代培养膀胱癌细胞株BIU-87,体外细胞抑制实验(MTT)比色法确定EPI和MMC的IC50,分为单纯细胞培养组,MMC组和EPI组3组,各在24小时,48小时提取细胞培养液作为标本,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,每种标本用IMAC-3-Cu芯片检测。分析各组之间的蛋白质谱表达的差异。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software 3.0软件分析。实验重复3次。结果EPI和MMC的IC50分别是5mg/L和10mg/L。选用该浓度作为本实验的药物处理浓度。获得各组蛋白质谱图;在对其比较时发现:在未加药细胞培养组出现5个新蛋白峰表达,分别是M/Z 3360,3707,3850,3940,4023,而EPI组这五个蛋白峰的峰值均较单纯细胞培养组表达产生差异,较同时间未加药对照组在48h时M/Z 3360处表达升高;M/Z 3707,M/Z 4023处在24,48h时表达减少;M/Z 3850,3940处在24h时表达减少,但在48h时与对照组无明显变化。在MMC组中与单纯细胞培养组相比在上述5个蛋白峰中有4个蛋白峰的峰值产生差异,另还出现两个新的蛋白峰:在48h时M/Z 3360处有减少;M/Z 3707,4023处在24h,48h时均减少;M/Z 3850处在24h时无变化,但在48h时减少;M/Z 3940处在24,48h时无变化;在M/Z 6030,6892处在24h时发现新峰,但在48h时未测到。结论表浅性膀胱癌细胞株BIU-87的体外细胞培养液中存在5个新的蛋白质峰,丝裂霉素C、表阿霉素处理细胞后可对其细胞外培养液蛋白质谱表达产生影响。
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