【摘 要】
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目的:本研究旨在阐明CB2介导自噬在延缓AF退变中的作用及机制。方法:收集脊柱手术患者AF组织作为研究对象,通过免疫组织化学染色比较其CB2的表达。以原代Sprague-Dawley(SD)大鼠AF细胞为研究对象,采用过氧化氢(Hydrogen Peroxide,H2O2,100μM)构建 AF 退变模型。分别用 JWH133,AM630,雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和 3-MA 进行
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目的:本研究旨在阐明CB2介导自噬在延缓AF退变中的作用及机制。方法:收集脊柱手术患者AF组织作为研究对象,通过免疫组织化学染色比较其CB2的表达。以原代Sprague-Dawley(SD)大鼠AF细胞为研究对象,采用过氧化氢(Hydrogen Peroxide,H2O2,100μM)构建 AF 退变模型。分别用 JWH133,AM630,雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和 3-MA 进行干预。通过 AdPlus-mCherry-GFP-LC3B双荧光标记法,RT-PCR,免疫荧光染色,Western Blot和生物透射电子显微镜分别检测AF细胞内ECM、细胞自噬和细胞凋亡相关标志物的表达水平差异以及AKT依赖信号通路通过调节自噬对AF退变的影响。结果:人体退变AF组织中CB2表达减少,在体外H2O2诱导的退变AF中表达增加。研究证实了激活CB2可以调节ECM合成,抑制H2O2诱导的ECM降解。证实了细胞自噬参与调节H2O2诱导的AF退变,并起保护作用。进一步实验证实了激活CB2可以诱导AF细胞自噬表型的发生,可能与ECM的调控密切相关。3-MA的加入可以抑制激活CB2上调的Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的合成,维持H2O2诱导的MMP3,MMP13和细胞凋亡的高水平表达免受激活CB2的影响,说明CB2的保护作用是通过调节细胞自噬介导的。对信号通路的研究证实了CB2可以通过抑制AKT-mTOR-p70S6K信号通路调节细胞自噬。结论:人体退变AF组织中CB2呈低表达。激活CB2可以抑制AKT-mTOR-p70S6K信号通路的表达从而调节细胞自噬,达到延缓AF退变的目的。靶向激活CB2,可以改善H2O2诱导的AF退变。
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