论文部分内容阅读
目的研究β-淀粉样蛋白(Beta amyloid protein,Aβ)对癫痫(Epilepsy,EP)病理机制发生发展的影响。从疾病发病机制的角度,探讨EP发作易感性增加与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)病理改变之间的相关性。方法选用6-8周成年Wistar大鼠40只,随机分为β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)+匹罗卡品(Pilocarpine,PILO)组、Aβ1-42组、磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)+PILO组、PBS组,每组各10只。采用脑立体定位仪将Aβ1-42注入Wistar大鼠海马CA3区,2周后观察大鼠Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期、目标象限内游泳时间比例和穿越平台次数,应用统计学分析软件,检测大鼠AD模型是否成功。建模成功后通过腹腔(Intraperitoneal,IP)注射氯化锂-匹罗卡品(Lithium chloride Pilocarpine,LI-PILO)制备大鼠慢性EP发作模型,依据Racine分级标准,记录EP发作潜伏期(达到IV级及以上发作所需时间)、发作程度和死亡率;采用改良的Timm’s染色方法观察各组大鼠海马齿状回(Dentate gyrus,DG)苔藓纤维芽生(Mossy fiber sprouting,MFS)水平。结果制备大鼠AD模型:注射Aβ1-42后,AD模型组和PBS对照组大鼠各死亡1只,解剖未发现明显人为死亡原因,推测可能的致死原因为大鼠之间存在个体差异;Morris水迷宫实验数据分析结果,AD模型组与PBS对照组大鼠相比逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标象限内游泳时间比例缩短(P<0.05),穿越平台的次数也明显减少(P<0.05),差异均有统计学意义,表明AD模型制备成功。制备大鼠EP模型:依据Racine分级标准,Aβ1-42+PILO组与PBS+PILO组相比,EP发作潜伏期显著缩短(P<0.01),发作程度更重(P<0.05);Aβ1-42+PILO组与PBS+PILO组、PBS组相比死亡率均显著增加,分别为P=0.0294、P=0.0108。大鼠脑组织病理学实验:改良的Timm’s染色结果显示,Aβ1-42+PILO组与PBS+PILO组比较海马DG MFS染色强度显著增强(P<0.05);在Aβ1-42组也观察到海马DG MFS染色强度增强,但和PBS+PILO组相比无统计学差异(P>0.05);PBS+PILO组和PBS组比较MFS染色强度显著增强(P<0.01);Aβ1-42组和PBS组比较MFS染色强度也显著增强(P<0.01)。结论通过海马CA3区注射Aβ1-42,可以导致大鼠出现与海马有关的学习和记忆功能受损,采用Morris水迷宫实验从行为学上进一步验证上述功能障碍,证明Aβ可以诱导大鼠出现痴呆样行为改变。在Aβ存在的基础上诱导大鼠出现EP发作易感性是增加的,说明Aβ对于EP发生有一定的促进作用,从疾病病理学角度阐明AD与EP发作密切相关。组织化学染色观察到Aβ1-42+PILO组海马DG MFS存在高强度染色,进一步从病理生理学机制上验证Aβ诱导大鼠EP发作易感性增加的结构基础可能与MFS水平显著增加有关。尽管在Aβ1-42组没有EP发作,该组大鼠海马DG也出现MFS染色增强,这表明MFS不仅是EP发作的结果,而是代表在这些大鼠中固有的异常网络连接。在EP发作的“二次打击”学说中,Aβ可能的作用机制是导致大脑出现第一次脑损伤。EP发作易感性增加与AD发病机制之间具有显著的相关性。