【摘 要】
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目的:本实验拟探讨Wnt3a蛋白转染BMSCs（骨髓间充质干细胞）后会对慢性阻塞性肺病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease;COPD）炎症因子（IL-10;IL-6;IL-1β）表达产生什么影响,为骨髓间充质干细胞治疗COPD慢性炎症提供理论基础。方法:采用全骨髓贴壁细胞法提取、培养BMSCs。采用Wnt3a慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞。脂多糖（LPS）联
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目的:本实验拟探讨Wnt3a蛋白转染BMSCs（骨髓间充质干细胞）后会对慢性阻塞性肺病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease;COPD）炎症因子（IL-10;IL-6;IL-1β）表达产生什么影响,为骨髓间充质干细胞治疗COPD慢性炎症提供理论基础。方法:采用全骨髓贴壁细胞法提取、培养BMSCs。采用Wnt3a慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞。脂多糖（LPS）联合烟熏制备COPD大鼠。实验分4个组,健康对照组（C组）:经尾静脉注射入1ml PBS液至正常大鼠体内。COPD组（S组）:经尾静脉注射入1ml PBS液至COPD大鼠体内。BMSCs组（M组）:经尾静脉注射入标记的MSCs至COPD大鼠体内,量为1×10~6/ml PBS;Wnt3a-BMSCs组（I组）:经尾静脉注射入P3代Wnt3a-BMSCs至COPD大鼠体内,量为1×10~6/ml PBS。各组大鼠分别在第7天、第14天、第28天处死,留取肺组织。采用Western blot法检测肺组织中IL-10、IL-6、IL-1β蛋白的表达情况,qRT-PCR法检测肺组织中IL-10、IL-6、IL-1βmRNA的表达情况。结果:1.提取、培养的BMSCs,采用流式细胞术鉴定结果:CD29（96.3%）、CD44（69.2%）高表达,而CD34（0.25%）、CD45（0.74%）表达量较低。2.Wnt3a慢病毒成功转染BMSCs,Wnt3a基因在COPD大鼠体内高表达。3.脂多糖（LPS）联合烟熏法可成功构建COPD大鼠模型。4.Western blot法检测肺组织中IL-10、IL-6、IL-1β蛋白的表达结果显示:（1）促炎因子IL-6、IL-1β在COPD组D7、D14、D28三个时间点均比健康对照组（control组）表达增多,呈递增趋势,D28最明显,P<0.05;而抗炎因子IL10在COPD组D7、D14、D28三个时间点均比健康对照组（control组）表达减少,呈递减趋势,D28最明显,P<0.05。（2）在第28天这个相同时间节点,促炎因子IL-6、IL-1β在COPD组中蛋白表达量高于健康对照组,而BMSCs组、Wnt3a-BMSCs组蛋白表达量比COPD组低,其中Wnt3a-BMSCs组较BMSCs组更低,P<0.05;抗炎因子IL-10在COPD组中蛋白表达量低于健康对照组,而BMSCs组、Wnt3a-BMSCs组蛋白表达量比COPD组高,其中Wnt3a-BMSCs组较BMSCs组更高（均P<0.05）;5.qRT-PCR法检测肺组织中IL-10、IL-6、IL-1βmRNA的表达情况:（1）与健康对照组相比,随着时间进展（D7;D14;D28）,促炎因子IL-6、IL-1β在COPD组表达呈递增趋势,其中D28增加最显著（均P<0.05）;而抗炎因子IL10在COPD组表达呈递减趋势,其中D28减少最显著（P<0.05）。（2）在28天这个相同的时间节点,促炎因子IL-6、IL-1β在BMSCs组和Wnt3a-BMSCs组较COPD组低（均P<0.001）,BMSCs组和Wnt3a-BMSCs组两组相比,Wnt3a-BMSCs组较BMSCs组相对较低,（P<0.001）。抗炎因子IL-10在BMSCs组和Wnt3a-BMSCs组较COPD组高,BMSCs组和Wnt3a-BMSCs组两组相比,Wnt3a-BMSCs组较BMSCs组相对较高,（P<0.0001）,差异具有统计学意义,提示BMSCs抗炎作用增强。结论:外源性Wnt3a-BMSCs、BMSCs移植对COPD大鼠肺组织中抗炎因子IL-10的表达有较为明显的促进作用,而对促炎因子IL-6、IL-1β的表达均有较为明显的抑制作用,且Wnt3a-BMSCs对炎症因子的作用效果优于单纯的BMSCs。
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