【摘 要】
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目的:探讨过表达Wnt3a（Wnt/β-catenin信号通路关键信号分子）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）在慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）大鼠模型肺部定植及分化的影响。方法:1)BMSCs的培养及鉴定:采用全骨髓贴壁法获取大鼠BMSCs,经流式细胞术表型鉴定后予CM-Dil标记。2)通过Wnt3a慢病毒转染P3代大鼠BMS
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目的:探讨过表达Wnt3a（Wnt/β-catenin信号通路关键信号分子）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）在慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）大鼠模型肺部定植及分化的影响。方法:1)BMSCs的培养及鉴定:采用全骨髓贴壁法获取大鼠BMSCs,经流式细胞术表型鉴定后予CM-Dil标记。2)通过Wnt3a慢病毒转染P3代大鼠BMSCs,并用Western、qPCR检测Wnt3a的表达情况。3)采用脂多糖注入气道联合烟熏法建立COPD大鼠模型,周期为1个月。每组处理如下:正常对照组（A组）:经尾静脉注入1ml PBS;COPD组（B组）:COPD造模后经尾静脉注入1ml PBS;BMSCs组（C组）:COPD造模后经尾静脉注入CM-Dil标记的P3代BMSCs;Wnt3a-BMSCs组（D组）:COPD造模后经尾静脉注入CM-Dil标记的携带Wnt3a基因的P3代Wnt3a-BMSCs。造模后分别于D7、D14、D28处死各组大鼠,留取每次肺组织切片行HE染色后观察病理学变化.4)分析BMSCs在肺组织中的定植与分化:a)在激光共聚焦显微镜下观察肺组织切片,Image J统计CM-Dil标记的细胞个数及同一视野所有细胞,分析BMSCs在肺组织中的定植率;b)肺组织切片进行免疫荧光染色,随机取多个非重叠视野计数表达肺泡上皮特异蛋白SPC的BMSCs和被CM-Dil标记的BMSCs,Image J统计双阳性细胞数,分析BMSCs在COPD肺组织中的分化率。结果:1.流式细胞仪检测到分离培养的大鼠BMSCs表面标志物CD29（97.4%）和CD44（74.6%）均呈现高表达状态,而CD34（0.13%）、CD45（0.56%）均呈现低表达状态。2.Western、qPCR结果均提示慢病毒转染后的BMSCs成功表达Wnt3a。3.HE染色结果:COPD组（B、C、D组）较正常对照组（A组）的肺泡结构均有破坏,提示COPD造模成功。4.激光显微镜下发现,BMSCs组（C组）、Wnt3a-BMSCs组（D组）的肺部切片中均有CM-Dil（红色荧光）标记的BMSCs,且在相同时间点,Wnt3a-BMSCs组（D组）的BMSCs定植率高于BMSCs组（C组）（P<0.05）,提示过表达Wnt3a能促进BMSCs在肺组织中的定植;免疫组织荧光染色结果示:BMSCs组（C组）、Wnt3a-BMSCs组（D组）中被CM-Dil（红色荧光）标记的部分BMSCs可同时表达肺泡上皮细胞特异蛋白SPC（绿色荧光）,且在相同时间点,Wnt3a-BMSCs组（D组）的双阳性细胞数所占比例高于BMSCs组（C组）（P<0.05）,提示过表达Wnt3a能促进BMSCs在肺部的分化。结论:过表达Wnt3a的BMSCs移植入COPD大鼠体内,可促进BMSCs在肺组织中的定植及向肺泡上皮细胞的分化,从而改善肺组织病理结构,促进肺修复过程。
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