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目的乳腺癌是女性最常见的原发恶性肿瘤之一,严重危害女性的生命健康和生活质量。尽管多学科立体化综合治疗在临床的广泛应用已经极大的改善了乳腺癌患者的预后,但是乳腺癌自身分子机制的多样性、复杂性、异质性使得乳腺癌的临床治疗效果仍需进一步的提高。已有的传统临床病理参数（淋巴结状态、肿瘤大小、组织学分级等）及组化分子指标（ER、PR、HER2、Ki-67等）已经无法满足人们对于乳腺癌预后预测的要求。探索乳腺癌的分子发病机制并寻找新的治疗靶标,无疑是目前乳腺癌研究的重要任务。Girdin是一种肌动蛋白结合蛋白,参与细胞内多条信号通路和多种生物学过程。近来研究表明Girdin蛋白表达异常与人类多种肿瘤的发生发展有关。已有的研究结果表明Girdin蛋白主要表达于胞浆中,目前关于Girdin蛋白的亚细胞定位及其在乳腺癌中的临床意义鲜有报道。本研究旨在明确Girdin蛋白在乳腺癌中的亚细胞定位,分析Girdin蛋白不同亚细胞定位在乳腺癌中的临床意义。方法1.分别从组织水平和细胞水平,明确Girdin蛋白在乳腺癌细胞中的亚细胞定位。（1）随机选取天津医科大学肿瘤医院收治的515例乳腺浸润性导管癌的石蜡标本,利用免疫组化方法检测Girdin蛋白在乳腺癌组织中的亚细胞定位;（2）在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和稳定过表达Girdin的MDA-MB-231细胞系中,利用免疫荧光、胞浆-胞核分离、免疫蛋白印迹等方法检测内源性及外源性Girdin蛋白的亚细胞定位。在此基础上运用出核抑制剂LMB及细胞染色质蛋白分离方法,分析Girdin在细胞核中的具体定位及其可能的生物学意义和作用。2.在已有的515例乳腺浸润性导管癌石蜡标本的基础上,继续随机选取114例乳腺导管内原位癌石蜡标本和254例乳腺良性病变石蜡标本。利用免疫组化法分别检测乳腺浸润性导管癌（IDC）、乳腺导管内原位癌（DCIS）、乳腺良性病变（Benign lesions）组织标本中Girdin蛋白的表达情况。分析Girdin蛋白不同亚细胞定位的表达水平与病变恶性程度的关系。并结合乳腺癌患者的临床病理信息（如组织学级别、肿瘤大小、淋巴结转移情况、ER、PR、HER2、Ki-67状态、分子亚型等）以及术后随访信息（生存状况、复发、转移情况）,统计分析Girdin蛋白不同亚细胞定位的表达情况与临床病理参数的关系,及其对乳腺癌患者预后的影响。结果1、在乳腺癌组织标本中,Girdin蛋白呈现胞浆表达和胞核表达两种表达方式。同样地,在人乳腺癌细胞系中,Girdin在胞浆和胞核中均有表达。使用出核抑制剂LMB处理乳腺癌细胞后,Girdin蛋白在细胞核中的表达水平明显增加。此外,细胞染色质蛋白分离试验结果显示,Girdin在细胞核内与染色体或其他核内不溶性物质相结合。2、本研究分别对515例乳腺浸润性导管癌、254例乳腺良性病变和114例导管内原位癌石蜡标本中Girdin蛋白的表达情况进行检测。结果显示,Girdin在癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并且Girdin的表达水平随着病变恶性程度的增加而升高（胞浆表达:IDC>DCIS>Benign lesions;胞核表达:IDC>DCIS,IDC>Benign lesions）。Girdin胞浆表达水平与PR、Ki-67的表达水平呈正相关,Girdin胞核表达水平与ER表达水平呈正相关。3、本研究共纳入398例具有完整随访及病理资料信息的乳腺癌病例,并利用Kaplan-Meier法及Cox比例风险回归模型分析了Girdin浆表达与患者生存之间的关系,结果表明:（1）Girdin胞浆表达与乳腺癌患者的OS和PFS呈负相关,Girdin胞浆高表达的乳腺癌患者总生存（OS）及无进展生存（PFS）较差（OS:P=0.040;PFS:P=0.008）。五年内发生转移、复发或死亡组中Girdin胞浆高表达患者所占比例显著高于五年内未发生转移、复发或死亡组（48.8%vs.35.9%,P=0.041）。Girdin胞浆表达水平与骨转移呈正相关（rs=0.104,P=0.042）。发生骨转移人群中Girdin胞浆高表达患者所占比例显著高于未发生骨转移人群（48.9%vs.33.4%,P=0.042）。（2）根据免疫组化指标对乳腺癌人群进行分组,生存分析结果显示:在Ki-67阴性表达人群和PR阳性表达人群中,Girdin的胞浆表达水平与患者的OS和PFS呈负相关,即Girdin胞浆高表达患者的OS和PFS较差（PR阳性人群:OS P=0.018,PFS P=0.005;Ki-67阴性表达人群:OS P=0.006,PFS P=0.002）。在PR阳性且Ki-67阴性表达的患者中,Girdin的胞浆表达水平与患者的OS和PFS也呈负相关（OS:P=0.046,PFS:P=0.009）。（3）对各分子分型乳腺癌患者进行生存分析,结果显示:Girdin胞浆表达水平与luminal型患者的OS和PFS呈负相关,即Girdin胞浆高表达提示患者更差的OS和PFS（OS:P=0.035,PFS:P=0.013）。在non-luminal型患者中,Girdin胞浆表达水平与患者的OS和PFS无显著关系（OS:P=0.736,PFS:P=0.355）。进一步分析发现:只有在luminal A型患者中,Girdin胞浆表达水平与患者预后（OS,PFS）存在负相关,而在luminal B型,HER2型以及三阴型乳腺癌人群中,Girdin胞浆表达水平对患者预后均无显著影响。（4）单/多因素Cox回归分析结果显示:Girdin胞浆表达水平是乳腺癌患者PFS的独立预后因子（HR[hazard ratio]1.714,P=0.011,95%CI[confidence interval]1.129-2.604）。同时Girdin胞浆表达水平也是PR阳性表达乳腺癌患者和luminal型乳腺癌患者的独立预后因子（PR阳性:OS:HR 2.321,P=0.016,95%CI1.173-4.595 PFS:HR 1.832,P=0.015,95%CI 1.126-2.980;luminal型:OS:HR1.970,P=0.036,95%CI 1.047-3.707 PFS:HR 1.780,P=0.014,95%CI1.125-2.818）。4、在398例乳腺癌人群中,利用Kaplan-Meier法分析Girdin胞核表达水平与患者生存之间的关系。结果显示,Girdin胞核高表达组患者的OS明显短于Girdin胞核低表达组患者,且两组之间的PFS无明显差异（OS:P=0.046,PFS:P=0.461）。进一步的多因素Cox回归分析发现,Girdin胞核表达水平是乳腺癌患者OS的独立预后因子（HR 1.831,P=0.039,95%CI 1.030-3.258）。5、联合评价Girdin的胞浆/胞核表达水平,将398例乳腺癌患者分成“浆高表达且核高表达”和“其他”两组,结果表明:（1）Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）与乳腺癌患者的OS和PFS呈负相关,即Girdin胞浆高表达/胞核高表达的患者总生存及无进展生存差（OS:P=0.002;PFS:P=0.039）。Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）与ER,PR,Ki-67状态呈正相关。（2）根据免疫组化指标进行亚组生存分析:在ER阴性表达人群、HER2阳性表达人群以及Ki-67阴性表达人群中,Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）均与患者的OS和PFS呈负相关,即Girdin胞浆高表达/胞核高表达提示患者更差的OS和PFS（ER阴性:OS:P=0.001,PFS:P=0.006;HER2阳性:OS:P=0.028,PFS:P=0.028;Ki-67阴性:OS:P=0.001,PFS:P=0.025）。此外,在HER2阴性表达人群和Ki-67阳性表达人群中,Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）均与患者的OS呈负相关,即Girdin胞浆高表达且胞核高表达的患者OS时间较短（HER2阴性OS:P=0.021;Ki-67阳性OS:P=0.038）。（3）各分子分型乳腺癌人群的生存分析结果显示:在luminal型和non-luminal人群中,Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）均与患者的OS呈负相关,即Girdin胞浆高表达/胞核高表达患者OS时间短（luminal:P=0.040,non-luminal:P=0.001）。进一步分析发现:在luminal A型和三阴型乳腺癌患者中,Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）与患者预后（OS）均呈负相关,而在luminal B型以及HER2型乳腺癌人群中,Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）对患者预后均无显著影响。（4）单/多因素Cox回归分析结果显示:Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）是乳腺癌患者OS的独立预后因子（Girdin胞浆/胞核表达水平:HR 2.601,P=0.002,95%CI 1.439-4.701）,同时也是乳腺癌患者PFS的独立预后因子（HR1.733,P=0.022,95%CI 1.082-2.775）。结论1.在乳腺癌中,Girdin不仅存在胞浆表达方式,还存在胞核表达方式。2.Girdin胞浆表达水平及胞核表达水平对预测乳腺癌患者预后具有不同的指导意义:Girdin胞浆高表达是乳腺癌患者PFS的独立不良预后因子,Girdin胞核高表达是乳腺癌患者OS的独立不良预后因子。3.与单独评价Girdin胞浆表达水平或胞核表达水平相比,联合评价Girdin胞浆胞核表达水平能够更精确的预测乳腺癌患者预后,且Girdin胞浆/胞核表达水平（联合评价）是乳腺癌患者OS和PFS的独立预后因子。