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本研究以’元红’荔枝叶片为材料,通过RT-PCR和RACE技术,通过同源克隆得到了荔枝CMT3及DRM2的cDNA全长序列和MET1的部分序列,以及类泛素修饰蛋白相关基因SAE2,SCE1,SUMO1-a和SUMO1-b基因的cDNA全长序列,并对它们进行了生物信息学分析。采集’元红’的不同部位组织,同时以’元红’荔枝的花药为材料,诱导胚性愈伤组织和体胚,根据最终产生的成熟体胚的形态,利用qPCR技术对其进行所克隆基因的表达量分析,进行并对其进行了在’元红’荔枝的不同部位组织中以及多种不同形态的成熟体胚中的定量表达分析。通过MSAP技术,对荔枝不同部位组织中的甲基化模式与水平进行分析。研究结果如下:1荔枝DNA甲基转移酶基因的克隆。采用同源的克隆的方法从荔枝叶片中克隆得到3种DNA甲级转移酶基因,其中1条为部分序列,2条为全长序列,分别命名为 LcMET1,LcCMT3 和 GeneBank 登陆号为:KY780308、KX886206和KY780307,将LcMET1在NCBI网站上进行Blast 比对,发现与其他物种的MET1基因高度同源,对LcCMT3和LcDRM2基因进行生物信息学分析,推测LcCMT3编码877个氨基酸,LcDRM2编码631个氨基酸,它们都是带正电的亲水蛋白,不含信号肽,不是跨膜蛋白,不存在螺旋卷曲结构,亚细胞定位预测都主要定位于细胞核,都具有DNA甲基转移酶的功能结构域。2荔枝类泛素化修饰相关基因的克隆。通过同源克隆的方法从荔枝的的叶片中克隆得到4个SUMO化修饰相关基因,分别命名为LcSAE2,LcSCE1,LcSUMO1-a和LcSUM01-b。GeneBank 登陆号为:KX886205、KY170859、KY780305 和 KY780306。对LcSAE2,LcSCE1,LcSUMO1-a和LcSUMO1-b进行生物信息学分析,推测LcSAE2编码643个氨基酸,具有一个UBA保守结构域,亚细胞定位预测定位于内质网;LcSCE1编码160个氨基酸,具有一个UBCc结构域,亚细胞定位预测在细胞核中;LcSUMO1-a编码105个氨基酸,LcSUMO1-b编码100个氨基酸,都具有一个UBQ保守结构域,亚细胞定位预测都定位于细胞核。它们都是带正电的亲水蛋白,不含信号肽,不是跨膜蛋白,不存在螺旋卷曲结构。3荔枝DNA甲基转移酶和类泛素化修饰相关基因在不同成熟体胚和不同部位组织的表达分析。在不同形态的成熟体胚中,LcSAE2,LcSCE1和LcSUMO1-b在形态发育最小的类型V中表达量极高,推测可能是SUMO1-b的大量修饰会抑制体胚的发育。LcMET1,LcCMT3和LcDRM2在有较长下胚轴且顶部开口的类型Ⅲ和类型Ⅸ成熟体胚中的表达量较低,推测可能LcMET1,LcCMT3和LcDRM2对体胚的下胚轴发育有抑制作用,但具体的作用机制还需要进一步设计试验来进行验证。在’元红’荔枝的不同部位组织中,发现LcMET1,LcCMT3,LcDRM2,LcSAE2和LcSCE1在醮核中的表达量都明显高于大核中的表达量,根据前人的研究,推测在荔枝的胚胎发育中,DNA甲基化与SUMO化修饰在胚胎发育的过程中和决定是否发生醮核上具有重要的作用。SUMO化相关基因在’元红’荔枝的生长旺盛的部位中表达量都较高,推测在荔枝的生长发育过程中,SUMO化修饰可能起着重要的促进作用。LcMET1,LcCMT3,LcDRM2,LcSAE2,LcSCE1,LcSUMO1-a和LcSUMO1-b在雌花与雄花间的表达差异都较为明显,推测在荔枝的花发育过程中,DNA甲基化和SUMO化修饰以及对花性别的决定起着比较重要的作用,但具体的机制还需要进一步探究。4荔枝MSAP体系的优化及其各组织器官的分析。通过多次试验,使用’元红’荔枝的基因组DNA为材料,预扩增使用的模板为未稀释的原液时扩增结果最好,使用引物浓度为各夹0.4mM·L-1为最佳。在荔枝的不同部位中,其DNA甲基化总体水平相对其他高等植物,处于较高的水平,其全甲基化水平略高于半甲基化水平,说明在’元红’荔枝中发生单链外部胞嘧啶甲基化或内外胞嘧啶皆甲基化的现象要少于双链内侧胞嘧啶甲基化的现象。在荔枝果核中,膨大期果核,大核和醮核的甲基化总体水平差异不大,膨大期果核的总体甲基化水平略低于醮核与大核,但醮核的全甲基化水平的27.41%明显低于大核的36.57%,大核的半甲基化水平的24.63%明显低于醮核的32.59%,猜测可能在膨大期果核发育的过程中,基因组DNA的甲基化在对果核的发育过程具有重要影响,并对决定果核是否发生醮核过程中发挥了重要的作用,DNA甲基化水平的改变,作为基因转录调控的一种重要方式,必定在荔枝的胚胎发育中的某些基因的转录过程中发挥着重要的作用。通过修饰调控启动子区域或是调节基因内部的甲基化状态,从而调节其转录效率,改变荔枝胚胎的发育情况,形成醮核或大核,这在某种意义上为揭示荔枝果实醮核与大核的形成的分子机制奠定了一定的基础。