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生物柴油属于可再生能源,是传统化石能源理想的替代品,而很多微藻能够高效合成油脂,为生产生物柴油提供了有力的原料保障。目前各国都加大了微藻油脂代微藻生物柴油的研究力度,在微藻藻种选育和改良、油脂代谢分子机制和规模化培养及采收等方面的研究均取得了显著的进展,也建立了一系列示范基地；然而,微藻生物柴油的成本仍然高于化石燃料。通过自然筛选和遗传育种,已得到了一些高产油的藻种,但这些藻种往往生长不良或培养条件苛刻,不利于规模化培养。为了解决这一问题,我们试图全面理解微藻体内物质代谢及其调控的分子机制,为藻种遗传改良提供理论依据。现有的高产汕的微藻大多尚未建立遗传转化体系,难以进行遗传操作；莱茵衣藻是一种单细胞真核绿藻,作为真核模式生物,现已建立了成熟的细胞核、叶绿体、线粒体基因组的遗传转化方法,此外,其基因组测序也全部完成,因此,本研究拟利用莱茵衣藻来研究ACP1和ACP2(酰基载体蛋白)在微藻油脂合成中的作用。ACP1和ACP2基因在植物中与油脂代谢密切相关,但在莱茵衣藻中尚无报道。本研究采用人工微RNA (artificial microRNA,amiRNA)技术,分析这两个基因对油脂合成的影响,主要研究结果如下：(1)采用基于一步PCR法和(MAGIC)接合辅助的遗传整合克隆的方法,分别构建针对ACP1和ACP2的amiRNA表达载体pmiR1162-ACP1和pmiR1162-ACP2;(2)采用玻璃珠法分别将amiRNA表达载体pmiR1162-ACP1和pmiR1162-ACP2转化莱茵衣藻CC-425细胞,PCR验证转基因衣藻的阳性克隆率为80%；(3)荧光定量PCR检测结果表明转基因衣藻中ACP1和ACP2基因的相对转录水平降低了28-57%；(4)在大肠杆菌Escherichia.coli BL21(DE3)中分别表达ACP1和ACP2基因,实验结果表明,ACP2基因获得表达,并制备ACP2抗体；(5)利用蛋白质印迹技术检测干扰衣藻中ACP2基因的蛋白质表达水平,结果表明,干扰衣藻ACP2蛋白表达水平大幅下降；(6)将干扰衣藻在缺氮TAP培养基的条件下培养,利用Nile red染色法测中性脂肪的结果显示,ACP1和ACP2基因的沉默对衣藻中中性脂含量降低的效果明显。