黄姜花挥发油中功能因子的捕获及其食品保鲜活性研究

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黄姜花是姜科姜花属多年生常绿直立草本植物,因其具有温中健胃等功效,是贵州黔东南地区常见的用于食疗的药食两用植物。查阅国内外文献发现,对黄姜花的研究较少且主要集中在姜科植物挥发油的化学成分上,本文主要是围绕黄姜花挥发油的制备、功能因子的捕捉、衍生物的制备及其抑菌活性和保鲜功效来进行研究的。采用水蒸气蒸馏法提取黄姜花根茎的挥发油(EO),用GC-MS分析其中的化学成分,3-NCS-氧化吲哚作为捕获剂,制备得到功能因子衍生物6,并通过~1H NMR、13C NMR、GC-MS等来大致确定功能因子衍生物6的主要化学成分;并对其做抗氧化实验,4种常见酶的抑制活性研究和抑菌活性筛选,初筛活性较好,做深入的抑菌机制探究。对提取的黄姜花根茎EO进行分析后发现,其中含量最多的化合物是:Linalool,而合成的功能因子衍生物6是螺环氧化吲哚类功能化合物,主要是由4个化合物(6a-6d)组成。依据DPPH和ABTS两种方法对黄姜花根茎EO和功能因子衍生物6的抗氧化活性进行测定,发现二者都有抗氧化活性,但功能因子衍生物6的活性远优于黄姜花根茎的EO,但仍稍弱于阳性对照药。将黄姜花根茎的EO和功能因子衍生物6分别对酪氨酸酶(TYR)、乙酰胆碱酯酶(ACHE)、丁酰胆碱酯酶(BCHE)、α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)进行酶抑制活性实验,结果表明:功能因子衍生物6的活性优于黄姜花EO的,其对TYR的酶抑制活性(IC50=107.25±5.81μg/m L)甚至优于阳性对照药熊果苷(IC50=286.13±74.33μg/m L);对α-glucosidase的抑制效果(IC50=5.61±0.15μg/m L)也优于阳性对照药阿卡波糖(IC50=236.81±26.88μg/m L)。将粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌作为指示菌,借助抑菌圈和微量稀释法初步筛出黄姜花根茎EO和功能因子衍生物6的抗菌活性。通过定性和定量实验发现,功能因子衍生物6的抑菌能力远强于黄姜花根茎EO,且对粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌这3种菌的抑制能力最强,由于前2种菌是益生菌,特选择金黄色葡萄球菌作为供试菌,以此来开展抑菌机理实验探究。将4种抗生素与功能因子衍生物6分别联合作用,并将其与6种菌株进行抑菌实验,按照公式计算FIC值并判断是否存在协同作用,结果表明:庆大霉素联合功能因子衍生物6对6种指示菌的FIC在0.63~1.25之间;对于粪肠球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的相加作用最好,FIC值都为0.63;功能因子衍生物6联合链霉素对6种菌的值在0.75~5.00;对枯草芽孢杆菌的相加作用最好FIC=0.75;与氯霉素联合的FIC值都大于1;与青霉素联合的FIC值在0.63~3.00之间,与金黄色葡萄球菌的相加作用最好。对功能因子衍生物6进行抑菌机制探究,通过罗丹明实验、核酸、蛋白质大分子物质外泄、胞内蛋白的合成分泌、活性氧实验的研究,可得出以下结论:功能因子衍生物6会破坏细胞内外膜电压的平衡性,破坏细胞膜,导致细胞内的蛋白质泄露到溶液中,妨碍细菌自主合成蛋白质,激活细胞的ROS发生变化,从而导致细胞内部活性的变化,最终影响细菌细胞的正常生长代谢或导致其死亡。新鲜果蔬的切面会出现褐变和脱色这一普遍现象,这主要是植物中存在的酪氨酸酶引起的,而抑制酶的活性,就能避免这一现象的发生。为验证样品对果蔬的酪氨酸酶有抑制活性和抗褐变作用,挑选果蔬来进行实验研究,通过新鲜的土豆片的表层颜色的变化和破损苹果表层果肉的褐化程度,可判断功能因子衍生物对果蔬具有一定的保鲜功效。本论文研究表明,制备的功能因子衍生物6具有抗氧化活性、抑制酶活性、抑菌活性和抑制果蔬褐变的能力,这表明在后续的研究中,功能因子衍生物6将在食品、化妆品、医疗等方面具有潜在的应用价值。
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