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目的:本课题通过体外实验研究淫羊藿苷与紫杉醇对人卵巢癌细胞的生长抑制作用、凋亡诱导作用以及对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响,从蛋白水平探讨其作用机制。 1.研究淫羊藿苷与紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系HEY和SKOV3细胞的生长抑制作用,评价淫羊藿苷对紫杉醇是否有协同作用; 2.研究淫羊藿苷与紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系HEY和SKOV3细胞的生长周期变化; 3.研究淫羊藿苷与紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系HEY和SKOV3细胞的凋亡诱导作用并探讨其可能的机制; 4.观察淫羊藿苷对人卵巢癌细胞系HEY和SKOV3细胞迁移、侵袭能力的影响并探讨其作用机理。 方法:采用CCK-8法检测不同浓度淫羊藿苷(10、20、40、80、160umol/L)对卵巢癌细胞HEY和SKOV3的生长抑制作用;CCK-8法检测淫羊藿苷协同紫杉醇对HEY和SKOV3细胞增值抑制作用的影响;流式细胞术检测淫羊藿苷联合紫杉醇对HEY和SKOV3细胞周期、细胞凋亡的影响;通过划痕实验观察不同浓度淫羊藿苷对卵巢癌细胞HEY和SKOV3的迁移能力的影响;通过Transwell小室法检测不同浓度淫羊藿苷对HEY和SKOV3的侵袭能力的影响;蛋白印迹法(Western blot)检测淫羊藿苷对HEY和SKOV3细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及与侵袭转移相关的蛋白MMP-9、PI3K、p-AKT表达的影响。 结果: 1.同一浓度的ICA,随着用药时间的逐渐延长(24h、48h、72h),对HEY和SKOV3细胞增殖的抑制作用逐渐增高。在72h时,ICA的抑制作用达到高峰,并且各组之间的差异具有统计学意义。不同浓度的ICA,在同一时间下,随着药物浓度的逐渐增加,其对HEY和SKOV3细胞的增殖的抑制作用亦逐渐增高。当ICA浓度大于40uM时各组间的差异具有统计学意义。 2.不同浓度的TAX联合一定浓度的ICA(10umol/L)作用于HEY和SKOV3细胞时,其抑制作用较单独使用明显增强,差异具有统计学意义。 3.经ICA处理后,HEY和SKOV3细胞的G1期细胞数占所有细胞的比例较对照组增大,并且随浓度的增加,G1期细胞比例有逐渐增大趋势,TAX与ICA联合作用于人卵巢癌细胞HEY和SKOV3细胞48h并与空白对照组对比,对于HEY细胞,联合用药组与空白对照组相比G1、G2期细胞增多,S期细胞减少,对于SKOV3细胞表现出G1期细胞数量减少,S期细胞数量略增加。 4.不同浓度的ICA(20uM、40uM、80uM)处理人卵巢癌HEY和SKOV3细胞48h后,与空白对照组比较,ICA组的细胞凋亡率显著增加,差异具有统计学意义。用浓度为20nM的紫杉醇与浓度为40uM的ICA联合作用于人卵巢癌细胞HEY和SKOV3细胞48h后,细胞凋亡率高于二者单独作用组。 5.划痕实验法结果显示,经ICA(浓度20umol/L)处理的卵巢癌HEY和SKOV3细胞,其划痕两侧的细胞间距较空白对照组细胞划痕两侧的细胞间距大。 6.Transwell侵袭实验结果显示每个200倍视野下,随着ICA浓度的增高,各组穿透基底膜的细胞数目呈递减趋势,各组间差异具有显著性。 7.淫羊藿苷对HEY和SKOV3细胞中Bax蛋白的表达具有上调作用,对Bcl-2、MMP-9、PI3K、p-AKT蛋白表达具有下调作用。 结论: 1.淫羊藿苷可以抑制卵巢癌细胞的增殖和凋亡,并且与紫杉醇联用具有协同作用,可能是通过上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡的; 2.淫羊藿苷能够抑制卵巢癌细胞的体外迁移、侵袭能力,MMP-9、PI3K、p-AKT参与了淫羊藿苷对卵巢癌细胞侵袭转移能力的调节。