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本文对粒毛盘菌(Lachnum)YM261(LEPS)多糖的分离纯化、结构特征及其活性进行了研究,主要结果如下:
在碳源、氮源、金属离子、起始pH和发酵时间五个单因素试验的基础上,利用正交试验法对Lachnum YM261胞外多糖发酵条件进行研究。得出最优发酵条件为:20%的马铃薯浸汁,葡萄糖22 g/L,酵母膏3 g/L、硫酸锰0.05 g/L。转速150 r/min,pH5.0下培养10 d,该条件下YM261胞外多糖产量可达2.77 g/L,相对于优化前提高了38.96%,通过单因素试验及正交试验得出粒毛盘菌YM261胞内多糖热水浸提的最优提取条件为:温度70℃,时间6 h,液料比80:1,多糖得率为7.92%。
通过测定Lachnum YM261多糖的还原能力,清除自由基能力、抑菌活性、抗疲劳以及对D-gal致衰老小鼠的抗衰老作用研究其生物活性,结果表明:多糖的还原能力随着浓度的增加呈增强趋势,且对羟自由基(·OH)、亚硝基(NO2-)和超氧阴离子(O2-·)具有明显的清除作用。YM261多糖对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和酿酒酵母具有一定的抑制作用,均随着多糖浓度的增加呈增强趋势。在抗疲劳试验中,低、中、高剂量LEPS组小鼠力竭游泳时间、肌糖原、肝糖原含量以及乳酸脱氢酶活力比正常对照组均明显增加,血尿素氮含量明显减少,并且呈量效关系。其中高剂量多糖组小鼠乳酸脱氢酶活力较正常对照组增加了31.72%,血尿素氮含量减少了51.49%。表明LEPS具有较好的抗疲劳作用。在抗衰老试验中,注射LEPS4周后,低、中、高剂量多糖可明显提高小鼠肝脏指数和脑指数。低、中、高剂量多糖组小鼠肝、脑匀浆和血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性比D-gal模型对照组均明显增加。而低、中、高剂量多糖组小鼠丙二醛(MDA)含量明显减少,其中高剂量多糖组小鼠肝、脑匀浆和血清MDA含量较D-gal模型组分别降低了43.37%、50.79%和52.81%。结果表明LEPS具有较强的抗衰老作用。
LEPS-1经高效凝胶渗透色谱检测为均一多糖,分子量为21670Da,GC-MS分析结果表明LEPS-1的单糖组分为葡萄糖,高碘酸氧化和smith降解分析证明LEPS-1存在不可被氧化的1→3糖苷键。红外光谱结果显示LEPS-1具有典型β-D型糖苷键的特征吸收峰,1HNMR谱显示LEPS-1为β-D-吡喃型糖苷键连接的多糖。这些结果表明LEPS-1的化学结构是以β-(1→3)-D-吡喃型糖苷键连接的葡聚糖。