背景食管癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,其发病率和死亡率分别占全球癌症的第7位和第6位,全世界每年大约有30万人死于食管癌,与西方国家不同的是发生在中国的食管癌约90%以上为鳞癌,食管鳞癌和食管腺癌是发病特征截然不同的两种疾病。由于发病机制不清,尽管近年来食管癌的诊断治疗方法有了较快进展,患者的预后仍然很差。本课题组前期研究发现,PRKCA在食管鳞癌的发展中可能扮演着十分重要的角色,但PRKCA对于食管鳞癌细胞的功能影响以及影响的机制尚不明确,此外PRKCA在食管鳞癌患者组织中的表达情况与患者预后之间的关系也有待进一步研究。因此,进一步明确PRKCA在食管鳞癌中的作用机制,是将PRKCA作为食管癌诊疗分子靶标的前提,具有重要意义。目的探究PRKCA在食管鳞癌浸润转移中的作用机制,为将PRKCA作为食管癌诊疗的分子靶标提供新思路。方法1.细胞系的培养和转染:根据预实验的实验结果最终选择以食管鳞癌细胞系EC9706、KYSE150作为实验模型,在37℃,二氧化碳浓度为5%的细胞培养箱中培养细胞,使用含有抗生素和10%血清浓度的1640细胞培养液培养细胞,转染试剂由invitrogen公司的RNAi MAX配置。2.在食管鳞癌细胞系中沉默PRKCA后,使用QIAGEN试剂盒抽提细胞RNA,采用实时荧光定量PCR（q-RTPCR）实验和免疫印迹实验（Western-blot）分别从转录后的RNA和翻译后的蛋白水平来检测沉默效率。3.在食管鳞癌细胞中沉默PRKCA后通过细胞的平板克隆实验来检测其对细胞的增殖的影响。4.经划痕、Migration和Invasion实验检测细胞的迁移与侵袭能力。将细胞铺入六孔板,待细胞均匀长满后划痕,观察两组细胞的愈合情况;将Transwell小室置于细胞培养孔板内,小室内用无血清培养液,小室外用含20%血清的1640培养液,一段时间后比较穿过小室的细胞量来反映细胞迁移与侵袭能力的大小。5.食管鳞癌细胞转录组RNA测序,从基因和蛋白水平探索PRKCA作用于食管鳞癌的作用机制。6.收集食管鳞癌患者临床样本及相关病理资料,电话随访患者健康状况,通过石蜡包埋、HE染色,运用免疫组化方法检测食管癌病理组织中PRKCA的表达水平,评估PRKCA的表达与患者生存期、年龄、生活习惯以及各种组织病理特征之间的关系。结果1.在食管鳞癌细胞系中沉默PRKCA,通过实时荧光定量PCR实验和免疫印迹实验检测,结果显示与对照组相比抑制了其m RNA和蛋白表达水平。2.在食管鳞癌细胞系中沉默PRKCA基因后,细胞增殖能力减弱,P<0.001,差异具有统计学意义。3.在食管鳞癌细胞系中沉默PRKCA,通过细胞划痕实验,Migration实验将实验组与对照组比较,细胞迁移能力弱于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。4.在食管鳞癌细胞系中沉默PRKCA,通过Transwell侵袭实验比较细胞侵袭能力的变化,与对照组相比,沉默PRKCA后,细胞的侵袭能力减弱。5.转录组RNA测序结果显示沉默PRKCA后,抑制了PI3K/AKT/MTOR信号通路、细胞周期蛋白以及上调基质金属蛋白酶MMP19蛋白的表达水平或蛋白的活性等从而调控食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。6.对219例患者的病理组织和临床资料进行统计学分析,结果表明PRKCA在食管鳞癌病理组织中的表达水平与患者病理组织的分化程度之间为与高分化组织相比,低分化组织中PRKCA的表达水平明显升高;与患者的临床分期呈现为临床分期越高PRKCA的表达水平越高,差异有统计学意义（P<0.01）;且在食管鳞癌患者病理组织中PRKCA的表达水平越高食管鳞癌患者的生存时间越短,差异有统计学意义（P<0.01）。但PRKCA在食管鳞癌组织中的表达量与患者的年龄、是否有吸烟史、饮酒史无明显关系。结论PRKCA可能是通过调控PI3K/AKT/MTOR信号通路中相关靶蛋白的活性,抑制其表达从而降低食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。PRKCA可能作为一种潜在分子靶标,为食管鳞癌的精准治疗提供了新的思路。