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本研究通过猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells, IEC)的体外培养,建立体外IEC模型,旨在从细胞水平、基因转录和蛋白表达三个层面研究不同浓度神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对猪IEC中Ⅱb型钠磷转运蛋白(sodium dependent phosphate cotransporter II b, NaPi-II b)表达及小肠无机磷(inorganic phosphorus, Pi)吸收的影响,阐释NPY调控Pi吸收的机理,为进一步研究动物Pi吸收和调控机制提供试验依据。试验设有6个处理,对照组未加NPY,其他处理组添加不同浓度的NPY(10-11mol/L10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L和10-7mol/L),每个处理设有6-8个重复,通过噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)比色法检测小肠上皮细胞的增殖情况,通过磷检测试剂盒采用磷钼酸法测定细胞上清液Pi含量的变化,采用荧光定量PCR技术检测IEC中NaPi-IIb mRNA的相对表达量,采用蛋白质免疫印迹(Western Blotting)技术检测NaPi-Ⅱb蛋白的相对表达水平。主要结果如下：在MTT试验中,用不同浓度的NPY刺激小肠上皮细胞24h,各处理组细胞增殖无显著性差异(P>0.05)在Pi吸收方面,细胞上清液中Pi含量随时间呈显著线性(P<0.01)和二次曲线(P<0.01)趋势下降；在干预24h后,各处理组细胞上清液中Pi含量组间呈现显著性差异(P<0.01),与对照组相比,10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/和10-7mol/L处理组上清液Pi含量呈显著性下降(P<0.01),IEC对Pi的吸收量分别提高了161%、171%、168%和139%。在基因转录水平上,用不同浓度的NPY刺激小肠上皮细胞24h后,10-11mol/LlO-10mol/L、lO-9mol/L和10-8mol/L处理组NaPi-IIb mRNA的表达量均显著高于对照组(P<0.05),NPY添加浓度与NaPi-IIb mRNA的相对表达量之间呈显著二次曲线关系(P<0.01)。在蛋白表达水平上,用不同浓度的NPY刺激小肠上皮细胞24h后,10一。mol/L10-9mol/L和10-8mol/L处理组NaPi-IIb蛋白的相对表达水平均显著高于对照组(P<0.05),NPY添加浓度与NaPi-Ⅱb蛋白的相对表达水平之间呈显著二次曲线关系(P<0.01)。综上所述,适宜浓度的神经肽Y可以通过刺激小肠上皮细胞NaPi-Ⅱb mRNA的表达,使NaPi-Ⅱb蛋白表达增多,进而诱导细胞外液中的Pi跨膜转运到细胞内液,促进小肠上皮细胞对Pi的吸收。本研究中,细胞培养液中NPY的最佳浓度在10-10mol/L～10-8mol/L之间。