JSI-124与5-FU联合用药模式对结肠癌细胞的生物学行为影响的研究

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目的:本研究是观察STAT3特异性抑制剂JSI-124与5-FU联用模式,对人结肠癌细胞株HT29和SW480生物学行为影响的研究,并且初步探讨其作用机制。  方法:本研究分别以单独用药、联合用药为研究方式,以JSI-124和5-FU作为细胞的干预药物,以人结肠癌HT29和SW480细胞作为干预细胞。用MTT方法检测药物对细胞的增殖抑制作用,检测两种药物的半数抑制浓度(IC50);应用流式细胞技术检测药物对细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western Blot,WB)检测细胞内P-STAT3及凋亡相关蛋白Bcl-2及其下游蛋白P21等的表达;采用平板克隆形成实验分别检测并观察两种药物单用及联用后两组细胞系增殖能力的变化;应用划痕实验检测并观察两组细胞系迁移能力的变化。  结果:1.MTT法实验结果显示:药物对细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量依赖性和时间依赖性。应用JSI-124,48h后人结肠癌细胞系HT29和SW480的IC50分别为:(5.72±0.24)umol/L和(5.78±0.29)umol/L;5-FU分别为(13.49±1.85)mg/L和(15.78±1.98)mg/L。两种药物联合应用,48h后观察实验结果,单药组及联合用药组均对细胞增生有抑制作用,联合用药组抑制作用更明显(P<0.05)。  2.采用AnnexinⅤ-FITC和PI(propidium iodide)双染的方法,用流式细胞仪检测给药后HT29和SW480细胞的凋亡现象。与对照组相比,JSI-124和5-FU单独给药组都出现了凋亡细胞比例的明显增加,JSI-124(5umol/L)和5-FU(5mg/L)同时给药时,出现了凋亡率的大幅增加,与单独给药组相比差异有统计学意义(P<0.05)。  3.Western Blot检测结果示:在人结肠癌细胞HT29和SW480中,经过单用JSI-124(5umol/L)或5-FU(5mg/L)处理后,两株细胞的P21的表达均增加,而P-STAT3和Bcl-2的表达随之减少,但在JSI-124联合5-FU组中P21的增加程度和P-STAT3、Bcl-2的减少程度均明显高于单用JSI-124组或5-FU组(P<0.05)。  4.平板克隆形成实验结果显示:在HT29细胞中,对照组克隆形成数为(67.9±6.35),单用JSI-124(1umol/L)组为(35.1±5.68),单用5-FU(2.5mg/L)组为(46.0±8.73),而JSI-124(1umol/L)与5-FU(2.5mg/L)的联合组仅为(25.6±7.81);在SW480细胞中,对照组克隆形成数为(56.8±9.2),单用JSI-124时细胞的克隆形成数为(32.1±6.71),单用5-FU组为(43.34±9.45),而JSI-124与5-FU的联合组仅为(19.6±7.24)。由实验结果可得出,JSI-124与5-FU组对细胞的克隆形成抑制作用明显高于二者单用,差异有统计学意义(P<0.05)。  5.采用划痕实验检测细胞迁移能力的变化,结果显示,划痕48h后,JSI-124(5umol/L)和5-FU(5mg/L)同时给药组划痕的愈合率低于对照组及单一用药组(P<0.05),在两种细胞系中均得出相同结论。  结论:1.JSI-124和5-FU两种药物均可阻滞人结肠癌HT29和SW480细胞的生长并且加快细胞凋亡,JSI-124和5-FU两种药物联合应用作用明显强于单独用药组(P<0.05)。  2.JSI-124和5-FU两种药物联合应用组给药可以显著阻滞人结肠癌细胞HT29、SW480的迁移能力,联合用药组的迁移抑制率显著高于单独用药组的迁移抑制率(P<0.05)。  3.JSI-124联合5-FU给药可显著降低HT29、SW480内P-STAT3的蛋白表达水平,其作用强于单药实验组(P<0.05)。由此可知,P-STAT3的表达水平与癌细胞增生有关。  4.JSI-124及JSI-124联合5-FU给药可显著阻滞癌症细胞中的STAT3磷酸化的表达,阻止活化的STAT3进入到细胞核内部,阻止其发挥进一步的作用。此外,JSI-124单独给药与JSI-124和5-FU联合给药都可以阻滞癌症细胞中STAT3活化,减少下游Bcl-2蛋白表达,增加P21蛋白表达,加快癌症细胞的凋亡。这表明JSI-124与5-FU联合作用于癌细胞,其发挥作用的机制可能与阻断JAK/STAT3通路有联系。
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