融合域点突变的埃博拉GP蛋白重组新城疫病毒的构建与免疫评价

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuxu19860802
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埃博拉出血热(Ebola haemorrhagic fever,EHF)是埃博拉病毒(Ebola Virus,EBOV)感染人体后导致发热和急性出血等症状的一种人兽共患烈性传染病。该病于1976年首次被报道,以2014年在西非爆发的EHF疫情最为严重,此次疫情导致超过28000人感染,11000人死亡,其危害性对人类公共卫生安全构成了严重威胁。我国虽未爆发该病,但仍需要研制出安全有效的疫苗来预防EHF。目前已报道埃博拉病毒具有6个亚型,扎伊尔型和苏丹型是造成人类感染的最主要病因,本迪布焦型和科特迪瓦型在人类中呈偶发感染,莱斯顿型和邦巴利型对人类没有致病性。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)的单股负链RNA病毒,其基因组编码6种结构蛋白(NP、M、P、F、L、HN)和2种非结构蛋白(W、V)。NDV作为活病毒疫苗载体具有较高的安全性和遗传稳定性,可以同时诱发动物机体多种免疫反应,因此被广泛应用于针对各种人类疾病的重组疫苗的研制。我们之前的研究表明,以NDV为载体构建表达EBOV GP的重组病毒rLa-EBOVGP改变了重组NDV的入侵方式。在此基础上我们将EBOV的GP蛋白融合域532位氨基酸由I突变为R后插入NDV LaSota疫苗株基因组中,通过NDV反向遗传学系统拯救出重组病毒rLa-EBOVGP(I532R)。通过生长动力学测定,重组毒株与亲本株具有相对一致的生长趋势,能保持良好的高滴度生长。同时,间接免疫荧光试验和免疫印迹试验证实GP(I532R)蛋白能够在重组毒株感染的细胞中正确表达。病毒体外感染试验表明,GP(I532R)失去介导重组病毒感染细胞并在细胞间传播的能力。免疫电镜结果表明GP(I532R)与rLa-ZEBOVGP中的GP一样,能够嵌合到重组病毒粒子表面。体外致病性试验和安全性试验表明重组毒株与亲本株一样具有良好安全性。小鼠免疫试验证明,rLa-ZEBOVGP(I532R)和rLa-ZEBOVGP一样可以诱导小鼠产生显著的针对EBOV GP的特异性中和抗体,且两种重组病毒的中和抗体水平无统计学差异。因此,我们的研究结果提供了一种更安全的改良型埃博拉病毒疫苗,并为进一步研究GP(I532R)的生物学功能奠定了基础。
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