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研究背景:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)发生远处转移被认为是患者死亡的关键因素之一。2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)是CRC患病的风险因素。达格列净(Dapagliflozin)是钠-葡萄糖同转运蛋白抑制剂2(SGLT2i),文献上,达格列净降低血糖水平的同时,还能抑制包括非小细胞肺癌的多种恶性肿瘤的进展。而关于达格列净对CRC的研究报道较少。研究目的:探究达格列净对抑制CRC转移和增加化疗的疗效,为CRC合并DM的临床治疗提供一个新的理论基础。研究方法:1.运用划痕愈合实验、Transwell迁移实验观察达格列净对结直肠癌细胞RKO形态学的改变、细胞活性及迁移能力等生物学功能的影响。2.通过化疗耐药实验检测达格列净对化疗药氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-FU)和奥沙利铂(Oaliplatin,OXA)在结直肠癌细RKO和SW480中的影响。3.通过构建裸鼠皮下瘤模型、脾背膜种植肝转移模型、盲肠原位种植肝转移模型观察达格列净对结直肠癌在体内转移的影响。4.通过Western blot及免疫荧光实验验证达格列净对结直肠癌RKO及HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。5.最后通过加入PI3K/AKT通路激活剂SB-216763,运用Transwell、划痕实验Western blot及免疫荧光实验验证达格列净对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。研究结果:1.划痕愈合实验和Transwell侵袭迁移实验结果显示达格列净在体外可以抑制CRC的侵袭和转移能力。划痕愈合实验中,在实验组经达格列净2μM处理,对照组加入DMSO 2μM处理后,达格列净处理后RKO细胞在48 h愈合为56.27%,而对照组仅愈合98.14%(P<0.002)。Transwell实验结果显示,与对照组相比,给予浓度的2μM达格列净处理后,RKO细胞从transwell小室中迁出的细胞数量明显减少。达格列净处理组细胞穿出生物膜的数量为48,而对照组细胞为172,说明达格列净抑制了结直肠癌细胞的侵袭能力。(P<0.001)。3.化疗耐药实验结果显示达格列净可以增强化疗药的敏感性。CCK8实验结果显示,达格列净+5-FU,或达格列净+OXA处理的结肠癌细胞均比对照组的细胞存活率低,联用应用达格列净可以增强化疗药物5-Fu和OXA对人结直肠癌细胞的杀伤作用。4.裸鼠皮下瘤模型、小鼠脾被膜种植肝转移模型、小鼠盲肠原位种植肝转移模型的结果显示,达格列净在体内同样可以抑制CRC的侵袭和转移。达格列净干预组裸鼠的皮下瘤体积、原位瘤、肝转移的数量都明显小于对照组。5.通过Western blot、HE及免疫荧光和免疫组化结果显示达格列净可以抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的磷酸化,并且抑制CRC细胞EMT的过程。结论:1.达格列净抑制CRC细胞的侵袭和迁移。2.达格列净增加CRC细胞对化疗药物5-FU和OXA敏感性。3.达格列净抑制裸鼠CRC的发展及转移。4.达格列净通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制CRC细胞EMT的过程。