论文部分内容阅读
近年来在逆转录病毒研究中发现的一些细胞内分子,包括Trim5a、Tetherin、 SAMHDI和APOBEC3等,均扮演对病毒感染的天然免疫限制角色,被称为天然免疫限制因子。这些限制因子通过不同的机制抑制病毒在细胞内的有效复制：TRIM5a能损伤病毒DNA合成和限制病毒脱衣壳；Tetherin可以限制病毒的出芽和释放；SAMHDI影响病毒DNA合成原料限制了病毒的复制；APOBEC3通过对病毒cDNA进行超突变来影响病毒的复制。而作为应对的策略,病毒也会进化出相应机制对这种天然的限制进行拮抗。病毒与限制因子间相互作用机制的研究,对于深入了解慢病毒感染机理和研发抗慢病毒药物有重要意义。马传染贫血病毒(equine infectious anemia virus, EIAV)是马属动物感染的慢病毒,是用于慢病毒研究的重要病毒模型。而在马属动物限制因子研究方面,多种马属动物限制因子逐渐被发现,并被证实具有限制EIAV复制的功能。本研究关注APOBEC3分子与EIAV间的相互作用机制,重点探讨我们克隆获得的一种马APOBEC3新突变体与EIAV之间的相互作用。首先克隆获得五种马APOBEC3基因,对其序列进行比对分析,发现一种eqA3Z3新突变体命名为eqA3Z3V2,并构建该APOBEC3分子的真核表达载体。通过EIAV三质粒系统对该APOBEC3分子限制EIAV活性进行评价,结果显示eqA3Z3V2和已报道的eqA3Z3、eqA3Z3V1都能够将病毒感染性降低10倍,。此外,eqA3Z3V2不仅能够限制EIAV第二轮复制,还能通过限制截短型Rev功能影响Gag蛋白的加工成熟,导致病毒产量下降。进一步研究证明eqA3Z3V2分子58位丙氨酸为其限制截短型Rev的关键氨基酸。而EIAV依赖完整型Rev拮抗eqA3Z3V2上述功能。除以上研究结果外,本研究还提出核输出通路可以调控EIAV Gag蛋白组装特性的新观点,并且首次构建出Rev/RRE、Gag和eqA3Z3V2三者间相互作用的模式图。本研究结果的获得,一方面有助于进一步解析马属动物A3s分子与EIAV间的相互作用机制；另一方面有助于发现Rev蛋白在病毒成熟过程中发挥的未知作用,丰富对EIAV这一马属动物感染的重要病原体的基础病原学研究。由于EIAV是可用于慢病毒研究的重要动物病毒模型,本研究揭示的EIAV病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的分子机制,必将为慢病毒感染和防治策略的研究提供重要参考。