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目的(1)通过检测血清中γ-氨基丁酸(Gamma-Aminobutyric Acid, GABA)水平,分析血清中GABA水平与儿童孤独症临床症状特点及疾病严重程度的相关性,初步探讨儿童孤独症的生化病理机制。(2)通过对GABRA4基因上两个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Poly-morphism, SNPs)位点rs1912960、rs2229940的检测,探讨河南地区汉族人群中GABRA4基因多态性与儿童孤独症的关系。为阐明儿童孤独症的发病机理,并为早期预报、有效防治提供理论依据。方法(1)将35名孤独症患儿作为病例组,35名健康儿童作为对照组,采用酶联免疫吸附法测定血清中的GABA水平,并进行组间比较。采用儿童孤独症评定量表(Childhood Autism Rating Scale, CARS)评定患儿的疾病严重程度。(2)在49个河南地区汉族孤独症核心家系(孤独症患者49人,父母94人)及正常对照人群(158人)中,检测GABRA4基因上两个单核苷酸多态性位点rs1912960、rs2229940,应用聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism-Polymerase Chain Reaction, PCR-RFLP)技术,测定了各样本位点的等位基因和基因型,进行以核心家系为基础的传递不平衡检验(Transmission Disequilibrium Test, TDT)及病例对照的关联研究。并且比较不同基因型患儿的CARS量表分值、血清中GABA水平的差异性。(3)采用DNA测序及序列分析的方法,对PCR-RFLP等位基因鉴别分析结果的准确性进行验证。(4)使用GENEHUNTER (version 2.4)软件对儿童孤独症核心家系进行TDT分析,使用Haploview 4.1软件分析单倍体,采用SPSS 13.0软件包进行统计分析,以a=0.05为检验水准。(1)病例组血清中GABA水平为(1.23±0.28μmol/L),对照组血清中GABA水平为(1.07±0.29μmol/L),病例组明显高于对照组,二者差异有统计学意义(t=-2.513,P<0.05)。(2)按CARS量表评分<36分和≥36分,将病例组分为轻-中和严重两组,比较两组血清中GABA水平,轻-中组为(1.31±0.25μmol/L),重度组为(1.17±0.29μmol/L),两组间差异无统计学意义(t=1.534,P>0.05)。(3)不同性别孤独症患儿血清中GABA水平之间差异无统计学意义(t=-0.368,P>0.05)。(4)将病例组CARS量表总分与血清中GABA水平做相关分析,发现二者之间无显著性相关(r=-0.109,P>0.05)。将病例组CARS各项得分与血清中GABA水平做相关分析,发现视觉反应因子项分值与血清中GABA水平之间呈显著性正相关(r=0.344,P<0.05),而其他各项得分与血清中GABA水平之间无显著性相关(P>0.05)。(5)孤独症患儿年龄与血清中GABA水平之间无显著性相关(r=-0.288,P>0.05)；患儿病程长短与血清中GABA水平之间呈显著性负相关(r=-0.382,P<0.05)。(6)对孤独症核心家系进行单位点SNP传递不平衡分析,两个位点均无统计学差异(P>0.05)；两个位点所组成的四个单倍体中亦未检测到不平衡传递(P＞0.05)。(7)两个SNP位点的对照组样本分布均符合H-W平衡。病例对照关联研究中,rs2229940多态位点等位基因(χ2=4.128,P<0.05)及基因型(χ2=9.438,P<0.05)频率比较均发现统计学差异。(8)孤独症组与对照组单倍体分型比较中,每一单倍体频率在两组之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(9)CARS量表人际关系因子项得分在rs2229940位点不同基因型的患儿间存在统计学差异(F=3.326,P<0.05),总分及其他各项得分无统计学差异(P>0.05)。经过进一步的LSD分析,人际关系因子项得分在C/C和C/A基因型的患儿间存在统计学差异(P<0.05)。CARS量表总分及各项得分在rs1912960位点不同基因型的患儿间无统计学差异(P>0.05)。(10)血清中GABA水平在两个SNPs位点的各个不同基因型之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)高血清GABA水平可能是儿童孤独症的生化指标之一,会影响孤独症患儿的视觉反应。(2)GABRA4基因多态性可能与河南地区汉族人群儿童孤独症的发生有关联。